农杆菌转化原理及技术ppt课件.ppt
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1、)可见比色分析 可见比色分析法就是吸收光谱在可见光范围内的分光 光度法。可见光波长范围是由紫色的400nm到红色的 760nm。 随着分光光度计的发展,比色测定已由分光光度计代 替了旧时的比色计。分光光度计与比色计相比,具有准确 、省时、选择性好的优点,现代的分光光度计都具有扫描 功能,可以通过吸收曲线,找出被测物质的最佳吸收波段 ,还可以从吸收曲线上选择合适的条件,以减少杂质的干 扰。 63 农药的可见光比色分析有以下几种情况: 农药有效成分本身带有颜色,可以直接进行比色,这 种农药数量很少,如敌克松原药为黄棕色,在波长435nm 处有最大吸收峰。故可直接进行比色测定。 农药本身无色,经化学
2、反应,引入或生成一个显色基 团而变成有颜色的化合物,此过程称为“显色”,大多数农 药都需要显色,才能进行测定。 (1)经化学反应可以生成有色化合物,如对硫磷经碱解 后形成对硝基酚而呈黄色。五氯酚经氧化形成四氯代苯醌 呈黄色。 (2)引入显色基团生成有色化合物:如农药经酸、碱水 解产生酚类或芳胺,可与偶氮试剂进行偶合形成有色化合 物,偶氮试剂则称为显色剂。 64 1含氯农药的颜色反应 (1)吡啶碱显色反应(Fujiwara反应) 含卤素农药在碱性溶液中,与吡啶短时间加热,至少 有两个卤原子和一个碳原子成键,产生红色或蓝色。 如DDT与含有呫啐酚的吡啶溶液及氢氧化钾加热生成 红色。可在510 nm
3、处测定光密度。 三氯杀螨醇在碱性条件下,水解产生氯仿,氯仿在碱 吡啶作用下生成红色,可在535nm处测光密度。氯丹可 以产生紫色(404nm),毒杀芬可产生黄色(400 nm),七氯 、克菌丹、敌敌畏等都有此反应,反应过程中,含有水或 乙醇对颜色形成有干扰。 65 (2)硝化甲醇钠法;含氯芳香族农药,经硝化后加甲醇钠 ,形成四硝基衍生物,经分子重排变为醌式,呈蓝色。如 对位DDT、对位DDD及三氯杀螨醇形成蓝色(598nm); DDE,DDA形成红色(420nm),邻位DDT形成紫色 (590511nm)。 66 六六六需加碱水解成l,2,4三氯代苯再经硝化与甲醇钠反 应形成6氯2,4二硝基间
4、苯二酚,呈黄色,可在415nm处测 定光密度。 67 (3)脱氯磺化显色反应: DDT,甲氧 DDT等在1乙醇氢氧化钾镕液中,脱 掉一分子氯化氢,再与浓硫酸反应,即呈现颜色,DDT为 桃红色;甲氧DDT为紫色。 (4)二苯胺氯化锌显色反应: 狄氏剂、毒杀芬等经与二苯胺、氯化锌混合熔融, 而形成蓝绿色化合物,将此化合物用丙酮或冰醋酸溶解, 即可进行比色。 (5)浓硫酸与铬变酸显色反应; 卤代苯氧乙酸类与浓硫酸反应产生甲醛,再与铬变酸 (1,8二羟萘、3,6二磺酸)加热到150出现紫色。 68 2含磷农药的颜色反应 (1)钼蓝比色法测全磷: 含磷农药用高氯酸及硫酸混合液,消化分解成无机磷 ,在酸性
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