重组人蛋白细胞因子的使用常见问题 - 细胞因子 - MedChemExpress.docx
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1、重组人蛋白细胞因子的使用常见问题 - 细胞因子 - MedChemExpress1 重组蛋白分类A. 按蛋白分类 B. 按种属分类a. 细胞因子 (Cytokines) a. 人 (Human)b. 生长因子 (Growth Factors) b. 小鼠 (Mouse)c. 趋化因子 (Chemokines) c. 大鼠 (Rat)d. 激素 (Hormones) d. 猴 (Rhesus Macaque)e. 神经营养因子 (Neurotrophins) e. 猪 (Porcine)f. 酶 & 酶抑制剂 (Enzymes & Inhibitors) f. 狗 (Canine)g. 其他 (
2、Others) g. 牛 (Bovine)B. 按种属分类 h. 其他(Others)2重组蛋白表达体系MCE 重组蛋白表达体系主要有:大肠杆菌,酵母细胞,昆虫细胞和哺乳动物细胞。3重组蛋白纯度和浓度测定重组蛋白纯度测定方法:a. SDS-PAGE 测定法;b. HPLC 测定法;c. 银染测定法。重组蛋白浓度测定方法:a. Bradford 蛋白定量测定法; b. BCA 蛋白定量测定法;c. SDS-PAGE 蛋白定量测定法。4重组蛋白运输状态MCE 的大部分重组蛋白产品为冻干粉,在室温环境中都是稳定的,一般采用蓝冰或是室温运输。5重组蛋白表达体系对比表达体系 优缺点原核体系 繁殖快、成本
3、低,产量高,但不能进行糖基化修饰,常为包涵体哺乳动物细胞结构与天然蛋白最接近,完善的翻译后加工,活性更好,但表达水平较低,周期长,技术要求高酵母细胞易操作,蛋白背景弱,适合大规模生产,便于纯化,但存在产量不高以及糖基化达不到要求等问题昆虫细胞功能与天然蛋白相似,对于部分有毒性或较难表达蛋白有优势,但糖基化程度低,形式比较单一,活性不如哺乳动物细胞表达系统6重组蛋白表达体系选择研究目的 蛋白要求 最适表达系统用作抗原,获得特异性抗体纯度80%,不需要蛋白修饰或天然活性,可带标签原核表达体系用于检测蛋白质结晶及晶体结构研究纯度95%,浓度通常在 10 mg/mL2/3 是原核表达体系,1/3 是昆
4、虫细胞表达体系与哺乳动物细胞表达体系蛋白的功能研究 需要保存蛋白的天然活性 原核表达体系和真核表达体系用于药物研究的蛋白质 一般要求尽量保存天然序列,具有天然活性 真核表达体系7 重组蛋白开盖使用前处理为防止冻干粉产品的粉末沾在管壁或管盖上,使用前请勿开盖,离心(约13000 rpm)处理 20-30 秒,使附于管盖或管壁的蛋白收集于管底。MCE 保证每管产品的蛋白总量达到标示含量。8重组蛋白复溶a. 使用前先离心( 约 13000 rpm)处理 20-30 秒,使附于管盖或管壁的蛋白收集于管底。b. 严格依据说明书,使用推荐的溶液将蛋白冻干粉溶解至推荐的浓度。大多数重组蛋白建议溶解在灭菌超纯
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