儿童社区获得性肺炎病例病原谱分析_黄小燕.pdf

1、分子诊断与治疗杂志2023年1月第15卷第1期J Mol Diagn Ther,January 2023,Vol.15No.1论著作者单位：1.广东省人民医院珠海医院（珠海市金湾中心医院）检验科，广东，珠海 5190412.广东省人民医院珠海医院（珠海市金湾中心医院）儿科，广东，珠海 5190413.广州达安临床检验中心，广东，广州 510670通信作者：黄小燕，Email：儿童社区获得性肺炎病例病原谱分析黄小燕1东建亭2曾宪鍫3摘要 目的分析珠海市金湾区 2018 至 2019 年儿童社区获得性肺炎病例的病原体谱结果，总结病原流行病学特征，为新发病例的诊治提供依据。方法回顾性分析 2018

2、年 12 月至 2019 年 11 月在珠海市金湾区住院，符合儿童社区获得性肺炎诊断的 805 例患儿咽拭子标本，通过多重 PCR 和Luminex 液相芯片杂交进行 13 种呼吸道病原体的核酸检测，对结果按照患儿年龄进行分组统计分析，各分组年龄区间为 06 月龄、612 月龄、13 周岁、37 周岁、7 周岁以上。结果580 例患儿咽拭子的病原体核酸检测为阳性；235 例患儿检出两或以上病原体核酸阳性；检出率最高的前 3 种病原体分别是肺炎链球菌（SP）、呼吸道合胞病毒（RSV）和肺炎支原体（MP）。RSV 在 1 岁以下低龄患儿中常见；ADV 和MP 在 1 岁以上患儿中检出率更高；其他病

3、原体在各年龄组段分布比较平均。大多数季节特异的病原体如 SP、HRV、MC、ADV、RSV 检出高峰在春季（13 月份）和冬季（1012 月），但也有少部分如 Hi 和 MP 有独立的流行规律，在非检出高峰时段流行。结论在临床诊断和治疗中，应注意病原体流行的季节性变化、不同年龄组常见病原体的差异以及多种病原体的感染。关键词 多重PCR；液相芯片杂交技术；儿童社区获得性肺炎；病原体；儿童Pathogen spectrum surveillance of children with community acquired pneumoniaHUANG Xiaoyan1，DONG Jianting2，

4、ZENG Xianqiao3（1.Department of Laboratory Medicine，Department of Guangdong Provincial Peoples Hospital Zhuhai Hospital（Zhuhai Jinwan Central Hospital），Zhuhai，Guangdong，China，519041；2.Department of Pediatrics，Guangdong Provincial Peoples Hospital Zhuhai Hospital（Zhuhai Jinwan Central Hospital），Zhuhai

5、，Guangdong，China，519041；3.Guangzhou Daan Clinical Laboratory Center，Yunkang Group，Guangzhou，Guangdong，China，510670）ABSTRACT ObjectiveTo analyze the pathogen spectrum results of communityacquired pneumonia cases among children in Jinwan District，Zhuhai City from 2018 to 2019，and summarize the epidemi

6、ological characteristics of the pathogens，to provide a basis for the diagnosis and treatment of new cases.MethodsThroat swabs of 805 children hospitalized in Guangdong Provincial Peoples Hospital Zhuhai Hospital（ZhuhaiJinwan Central Hospital）from December 2018 to November 2019 were collected，all of

7、whom were diagnosedcommunity acquired pneumonia according to their clinical symptoms.The nucleic acid of 13 respiratory tractpathogens was detected by multiplex PCR and liquid chip technology.The results were analyzed statistically according to the age groups of 06 months，612 months，13 years，37 year

8、s and 7 years.Results580throat swabs were detected positive，while 235 were detected two or more pathogenspositive.Among the 13pathogens，the 3 most common pathogenic etiologies were streptococcus pneumoniae（SP）respiratory syncytial virus（RSV）and mycoplasma pneumonia（MP）.RSV was popular in children yo

9、unger than 1 years oldwhile ADV and MP were detected more frequently in children elder than 1 year.And the other 10 pathogensare more evenly distributed across all age groups.Detection peaks of most seasonspecific pathogen such asSP，HRV，MC，ADV，and RSV are at spring（JanuaryMarch）and winter（OctoberDec

10、ember），but Hi and 14DOI:10.19930/ki.jmdt.2023.01.019分子诊断与治疗杂志2023年1月第15卷第1期J Mol Diagn Ther,January 2023,Vol.15No.1MP have independent epidemiological pattern，which are prevalent during nondetection peak hours.ConclusionIn clinical diagnosis and treatment，attention should be paid to the seasonal var

11、iation of pathogen prevalence，the difference of common pathogens among age groups and the infection of multiple pathogens.KEY WORDSMultiplex PCR；Liquid chip technology；Community acquired pneumonia；Pathogens；Children儿童社区获得性肺炎（Community AcquiredPneumonia，CAP）是我国 5 岁以下儿童的主要致死疾病，该病大部分缺乏特征性的临床症状，需要借助病原学方

12、法才能确诊；但传统的病原体分离培养和免疫学方法存在很多缺陷，难以及时准确地发现病原体12。本研究回顾性分析了 805 例于 2018 年 12 月到 2019 年 11 月在广东省人民医院珠海医院（珠海市金湾中心医院）就诊，符合儿童社区获得性肺炎诊断且其呼吸道标本采用多重 PCR 和 Luminex 液相芯片杂交技术进行了 13 种常见呼吸道病原体核酸检测的患儿的数据。通过对不同季节和年龄组的病原体谱分析，总结流行病规律，希望借此帮助临床医生形成更准确的临床诊断，使患儿获得更好的治疗。1资料与方法1.1一般资料回顾性分析 2018 年 12 月至 2019 年 11 月在广东省人民医院珠海医院

13、（珠海市金湾中心医院）就诊，符合儿童 CAP 诊断并进行了 13 种常见呼吸道病原体核酸检测的 805 例患儿的资料。其中，男性 475 例，女性 330 例；06 月龄患儿 85 例（10.56%），612 月龄患儿 162 例（20.12%），13 周岁 患 儿 267 例（33.17%），37 周 岁 患 儿 226 例（28.07%），7 周岁以上患儿 65 例（8.07%），中位数年龄为 2 岁。诊断标准依据 儿童社区获得性肺炎诊疗规范（2019 年版）和 儿童社区获得性肺炎管理指南（2013 修订）2。1.2方法1.2.1标本采集患儿咽拭子置于样品保存管中，冷藏（28）保存，并在2

14、小时内冷藏运输实验室进行检测。1.2.2实验室检测由广州达安临床检验中心实验室完成，试剂盒覆盖的病原体包括 7 种 DNA 病原：AdV、hBoV、MP、Hi、BP、MC、SP 和 6 种 RNA 病毒：RSV、hMPV、FluA、FluB、PIV 和 HRV。采用启动液相芯片检测仪（美国 Luminex 公司，型号：MagPix50）检测。1.3数据分析采用 SPSS 22.0 软件进行数据分析，计量资料以（x s）表示，两两比较采用 t 检验，计数资料以n（%）表示，采用2检验，采用 Fisher 确切概率法检验，对各年龄组的儿童住院肺炎病例的病原谱进行分析和比较。以P7 周岁组检出率最高

15、的是 MP，阳性患儿占比 29.23%；它与 SP 的感染特点接近，即随着年龄增加检出率上升。另外要特别注意的是，Adv 在大于 3 岁的两个年龄组（37 周岁组和7 周岁组）检出率均超过10%，而在低龄组的检出率较低，感染规律与MP类似。13 种呼吸道病原体在各年龄组中的检出率见表2。项目BPHRVhBoVSPMPPIVRSVMCFluAFluBHihMPVAdV06 月（n=85）2（2.35）4（4.71）0（0.00）10（11.76）7（8.24）8（9.41）26（30.59）8（9.41）1（1.18）0（0.00）14（16.47）4（4.71）1（1.18）612 月（n=1

16、62）0（0.00）14（8.64）5（3.09）46（28.40）6（3.70）16（9.88）36（22.22）22（13.58）5（3.09）1（0.62）16（9.88）8（4.94）1（0.62）13 周岁（n=267）0（0.00）22（8.24）4（1.50）100（37.45）29（10.86）16（5.99）47（17.60）31（11.61）12（4.49）4（1.50）29（10.86）5（1.87）15（5.62）37 周岁（n=226）2（0.88）13（5.75）1（0.44）71（31.42）40（17.70）8（3.54）8（3.54）19（8.41）10（4.

17、42）9（3.98）17（7.52）6（2.65）34（15.04）7 周岁（n=65）0（0.00）2（3.08）0（0.00）15（23.08）19（29.23）0（0.00）1（1.54）0（0.00）3（4.62）4（6.15）4（6.15）0（0.00）10（15.38）合计4（0.50）55（6.83）10（1.24）242（30.06）101（12.55）48（5.96）118（14.66）80（9.94）31（3.85）18（2.24）80（9.94）23（2.86）61（7.58）2值9.084.127.7022.3935.6312.7257.7811.032.5012.27

18、6.826.4541.29P 值0.060.390.100.01a0.01a0.01a0.01a0.03a0.650.02a0.150.170.01a表2不同年龄组下呼吸道感染患儿的病原体检测结果n（%）Table 2Pathogen detection results of children with lower respiratory tract infection in different age groupsn（%）注：理论值小于 5 的格子数过多，采用 Fisher 确切概率法；aP0.05，表示病原体检出率存在组间差异。2.3各病原体检出率的季节变化在13种病原体中，呈明显季节变化

19、的病原体有SP、HRV、MP、RSV、MC、HI 和 ADV。SP 的检出率在2月份和11月份有两个明显的检出高峰，检出率均大于40%；在79月份则维持在较低水平，形成波谷。HRV检出高峰在10月份，检出率接近20%。与其类似的是MP、MC、ADV和MP在710月也维持较高检出率，达到 20%以上；MC 检出高峰期则是1011月份；Adv的检出率从1月份开始缓慢上升，在11月份达到峰值，接近20%。与MP、MC和ADV相反，RSV的检出高峰在13月份；随后一直维持在较低的检出水平。Hi 的检出率亦呈现明显的季节性，5月份达到高峰，之后缓慢下降，在8月份之后维持一个较低的水平。另外的6种病原体B

20、P、hBoV、PIV、FluA、FluB 和 hMPV 无明显的季节变化规律。13种病原体详细的季节变化规律见图1。3讨论CAP 是我国儿童的常见病，其致病病原体多样。在临床上，通过临床症状和影像学资料往往难以判别致病病原体，需要依靠病原学方法进行病原体的确诊。在805例纳入研究的患儿中，病原体核酸阳性的患儿为580例（72.05%），检出两种或以上病原体核酸阳性的患儿为 235 例（29.19%）。混合感染（两种或以上病原体）对低龄儿童有更高的偏好性2；与单一病原体相比，在临床上往往预示更严重的临床症状和更差的预后。本研究中混合感染前 5 位的致病微生物中的 SP、MP、MC 和Hi 皆为疾

21、病条件致病微生物。该类微生物通常定植于健康人群的呼吸道粘膜中，在原发感染出现或机体免疫力下降之后引起继发性感染。依赖传统检测手段对原发感染病原体进行检测，往往会导致对此类微生物漏诊而延误病情36。本研究通过对各年龄组的患儿的病原体谱进行分析，发现随着年龄组的增长，FluB、MP、MC、Adv 和 SP 均呈现检出率逐步升高的趋势；而RSV、PIV 的检出率则呈现比较明显的下降趋势。对缺乏病原学检测手段的基层医院或边远地区的儿科临床医生，可参考上述病原体年龄组间差异结果。在选择经验性的治疗组合前，根据不同年龄段儿童的病原体谱特征，合理用药，提高临床诊断过程的效率。16分子诊断与治疗杂志2023年

22、1月第15卷第1期J Mol Diagn Ther,January 2023,Vol.15No.1本研究亦表明 SP、MP、HRV、RSV、Adv、MC和 Hi7 种病原体的检出率呈明显季节变化规律；RSV 检出高峰出现在 3 月份；SP 的检出率在 2 月份和 11 月份有两个明显的检出高峰；Hi 检出率在5 月份达到高峰；MP 在 710 月也维持较高检出率；HRV、MC和ADV的检出高峰期均是1012月份。大部分病原体的发病规律与孙志豪等人20172018 年在东莞地区的研究结果类似，提示珠三角地区邻近区域相近年份的监测结果，可为区域内的疾病流行病学情况提供借鉴79。综上所述，基于液相芯

23、片法的流式PCR技术检测通量更大，与传统培养或免疫学方法相比，具有更高的检出率，可大规模运用于 CAP 监测项目，使患者获益1013。但该检测技术对实验室和人员场地要求较高，在基层医院不能开展，这限制了该技术的运用；同时，检测结果的特异性不如传统的病原学分离培养方法。本研究结果提示，临床医生在临床诊疗活动中应注意病原体混合感染对患者疾病影响，病原体流行的季节变化，年龄组常见病原体差异等流行病学规律；从而更快地锁定感染病原体，合理选择药物，使患儿获得更好的治疗。参考文献1隋竑弢，王大燕，舒跃龙.呼吸道病毒多病原检测技术研究进展 J.病毒学报，2013，29（2）：238244.2中华人民共和国国

24、家健康委员会，国家中医药局.儿童社区获得性肺炎诊疗规范（2019 年版）J.中华临床感染病杂志，2019，12（1）：613.3中华医学会儿科学分会呼吸学组，编辑委员会中华儿科杂志.儿童社区获得性肺炎管理指南（2013 修订）（上）J.中华儿科杂志，2013，51（10）：745752.4宁桂军，王旭霞，刘世文，等.20152016 年甘肃省白银市5 岁以下儿童社区获得性肺炎疾病负担回顾性调查 J.中国疫苗和免疫，2017，23（1）：1821+12.5董泽丰，郑田利，范雪佳，等.20112013 年成都地区发热呼吸道症候群住院患儿鼻病毒流行病学特征 J.吉林大学学报（医学版），2016，42

25、（1）：177181.6胡云鸽，刘泉波.儿童百日咳 247 例临床特点及重症百日咳危险因素分析 J.中华儿科杂志，2015，53（9）：684689.7陈翊，连广琬，张莹莹，等.2012 至 2013 年广州地区儿童社区获得性肺炎病原学分析 J.中华临床感染病杂志，2014（6）：521525.8刘慧，肖新才，陆剑云，等.20092012 年广州市社区获得性肺炎流行特征和病原学研究 J.中华预防医学杂志，2013，47（12）：10891094.9孙志豪，张荣华，钟超珍.东莞市 20172018 年儿童下呼吸道感染病例监测结果 J.分子诊断与治疗杂志，2019，11（4）：329337.10

26、Kuriakose T，Hilt DA，Jackwood MW.Detection of avian influenza viruses and differentiation of H5，H7，N1，and N2subtypes using a multiplex microsphere assay J.Avian Dis，2012，56（1）：9096.11 Wu W，Tang YW.Emerging molecular assays for detectionand characterization of respiratory viruses J.Clin Lab Med，2009，2

27、9（4）：673693.12 袁翊，陈文碧，刘靳波，等.儿童下呼吸道临床分离菌的分布及耐药性 J.中国感染与化疗杂志，2017，17（5）：552557.13 黎俊宏，姚萍，李琼，等.多重 PCR 液相芯片技术在腹泻病原体检测中的应用 J.现代预防医学，2017，44（18）：33903394.2018 年 12 月2019 年 1 月2019 年 2 月2019 年 3 月2019 年 4 月2019 年 5 月2019 年 8 月2019 年 6 月2019 年 7 月2019 年 9 月2019 年 10 月2019 年 11 月10080604020010080604020010080

28、6040200100806040200100806040200100806040200100806040200100806040200100806040200100806040200100806040200100806040200100806040200SP%FLUB%MP%HI%PIV%HMPV%RSV%BP%MC%HRV%FLUA%HBOV%ADV%2018 年 12 月2019 年 1 月2019 年 2 月2019 年 3 月2019 年 4 月2019 年 5 月2019 年 8 月2019 年 6 月2019 年 7 月2019 年 9 月2019 年 10 月2019 年 11

29、月2018 年 12 月2019 年 1 月2019 年 2 月2019 年 3 月2019 年 4 月2019 年 5 月2019 年 8 月2019 年 6 月2019 年 7 月2019 年 9 月2019 年 10 月2019 年 11 月2018 年 12 月2019 年 1 月2019 年 2 月2019 年 3 月2019 年 4 月2019 年 5 月2019 年 8 月2019 年 6 月2019 年 7 月2019 年 9 月2019 年 10 月2019 年 11 月2018 年 12 月2019 年 1 月2019 年 2 月2019 年 3 月2019 年 4 月20

30、19 年 5 月2019 年 8 月2019 年 6 月2019 年 7 月2019 年 9 月2019 年 10 月2019 年 11 月2018 年 12 月2019 年 1 月2019 年 2 月2019 年 3 月2019 年 4 月2019 年 5 月2019 年 8 月2019 年 6 月2019 年 7 月2019 年 9 月2019 年 10 月2019 年 11 月2018 年 12 月2019 年 1 月2019 年 2 月2019 年 3 月2019 年 4 月2019 年 5 月2019 年 8 月2019 年 6 月2019 年 7 月2019 年 9 月2019 年

31、 10 月2019 年 11 月2018 年 12 月2019 年 1 月2019 年 2 月2019 年 3 月2019 年 4 月2019 年 5 月2019 年 8 月2019 年 6 月2019 年 7 月2019 年 9 月2019 年 10 月2019 年 11 月2018 年 12 月2019 年 1 月2019 年 2 月2019 年 3 月2019 年 4 月2019 年 5 月2019 年 8 月2019 年 6 月2019 年 7 月2019 年 9 月2019 年 10 月2019 年 11 月2018 年 12 月2019 年 1 月2019 年 2 月2019 年

32、3 月2019 年 4 月2019 年 5 月2019 年 8 月2019 年 6 月2019 年 7 月2019 年 9 月2019 年 10 月2019 年 11 月2018 年 12 月2019 年 1 月2019 年 2 月2019 年 3 月2019 年 4 月2019 年 5 月2019 年 8 月2019 年 6 月2019 年 7 月2019 年 9 月2019 年 10 月2019 年 11 月2018 年 12 月2019 年 1 月2019 年 2 月2019 年 3 月2019 年 4 月2019 年 5 月2019 年 8 月2019 年 6 月2019 年 7 月2019 年 9 月2019 年 10 月2019 年 11 月2018 年 12 月2019 年 1 月2019 年 2 月2019 年 3 月2019 年 4 月2019 年 5 月2019 年 8 月2019 年 6 月2019 年 7 月2019 年 9 月2019 年 10 月2019 年 11 月注：横坐标代表病原体检出的月份，纵坐标代表病原体检出的比率。图1805例患儿标本中13种呼吸道病原体检出率的季节分布特点Figure 1Theseasonal distribution of 13 respiratorypathogens in 805 children 17