发酵蔬菜源食品用益生乳酸菌的筛选及降胆固醇能力评价.pdf

1、研究论文发酵蔬菜源食品用益生乳酸菌的筛选及降胆固醇能力评价杜秋1，周晓，覃业优，喆（1.湖南农业大学食品科学技术学院，湖南长沙410 12 8；2.湖南坛坛香食品科技有限公司，湖南浏阳410 30 0）摘要：为了从发酵蔬菜中筛选出具有降解胆固醇能力的食品用益生乳酸菌，作者以融合魏斯氏菌（Weissella confusa)RW作为对照，采用定向分离法结合16 SrDNA分析不同来源的发酵蔬菜样品中得到5株具有降胆固醇能力的益生乳酸菌。结果表明，5株菌对pH2.0、质量浓度为3g/L的胆盐以及模拟胃肠液均具有耐受性，降胆固醇能力强（54.7 9%6 2.54%）、能够抑制病原菌且黏附于Caco-

2、2细胞上，表现出优良的益生特性。此外，5株菌均无溶血现象，不产生物胺，对多数抗生素敏感，安全性高。通过16 SrDNA鉴定5株菌分别为植物乳植杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)JCSMC-1、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SYB 和JCSMC6-2、副干酪乳酸菌（Lacticaseibacillus paracasei）SY D 和XSMC-1。本研究获得的1株植物乳植杆菌、2 株植物乳杆菌、2 株副干酪乳酸菌均具有食品用益生菌的基本特性，为开发食品用益生菌提供了新资源。关键词：发酵蔬菜；乳酸菌；益生菌；降胆固醇中图分类号：TS20

3、1.3文章编号：16 7 3-16 8 9(2 0 2 3)11-0 0 6 3-11D胡嘉亮，刘洋1，蒋立文*DOl:10.12441/spyswjs.20230423004Screening and Evaluating with Cholesterol-Lowering Ability of ProbioticLactic Acid Bacteria for Food from Fermented VegetableDU Qiu,ZHOU Xiao,QIN Yeyou,HU Jialiang,LIU Yang,JIANG Liwen(1.College of Food Science a

4、nd Technology,Hunan Agricultural University,Changsha 410128,China;2.HunanTantanxiang Food Technology Co.,Ltd.,Liuyang 410300,China)Abstract:In order to screen probiotic lactic acid bacteria for food with cholesterol-lowering abilityfrom fermented vegetable.In present study,taking Weissella confusa(R

5、W)as a reference,5 probioticlactic acid bacteria isolated with cholesterol-lowering ability were obtained from different fermentedvegetable samples via directional separation method combined with 16S rDNA identification method.The results showed that the five strains had excellent probiotic characte

6、ristics,with exhibiting thetolerance to acid(pH 2.0),bile salt(3 g/L)and simulated gastrointestinal fluids,and superiorcholesterol-lowering ability(54.79%62.54%),and inhibiting pathogen and adhere to Caco-2 cells.The strains showed excellent probiotic characteristics.Further,five isolates were safet

7、y with no收稿日期：2 0 2 3-0 4-2 3基金项目：湖南省重点领域研发计划项目（2 0 2 0 NK2027)。*通信作者：蒋立文（196 8 一），男，博士，教授，博士研究生导师，主要从事食品生物技术研究。E-mail：f s _l y 16 3.c o m修回日期：2 0 2 3-0 6-0 8食品5生物技术学报2 0 2 3年第42 卷第11期63DU Qiu,et al:Screening and Evaluating with Cholesterol-Lowering AbilityRESEARCHARTICLEof Probiotic Lactic Acid Bac

8、teria for Food from FermentedVegetablehemolysis phenomenon,no biogenic amines producing,and showed sensitivity to a variety ofantibiotics.Five isolates were identified as Lactiplantibacillus plantarum(JCSMC-1),Lactobacillusplantarum(SYB and JCSMC6-2),Lacticaseibacillus paracasei(SYD and XSMC-1)by 16

9、S rDNA.The isolates of 1 Lactiplantibacillus plantarum,2 Lactobacillus plantarum,and 2 Lacticaseibacillusparacasei all have the basic characteristics of probiotic lactic acid bacteria for food,providing newresources for the development of probiotic lactic acid bacteria for food.Keywords:fermented ve

10、getable,lactic acid bacteria,probiotics,cholesterol-lowering联合国粮农组织(FAO)、世界卫生组织（W H O）、国际益生菌和益生元科学协会（ISAPP）以及国际乳业联盟（IDF)对益生菌给出了定义：益生菌是活的微生物，当摄人足够数量时，对宿主的健康产生益处。因此，益生菌应具备足够数量、活菌状态和有益健康功能这三大特征 2 。2 0 0 3年,FA0/WHO提出了一套评价食品用益生菌的系统方法指南食品中益生菌评价指南，制定了益生菌的基本标准 3;2 0 2 2 年中国食品科学技术学会（CIFST)发布的食品用益生菌通则（以下简称通则）

11、，明确规定食品用益生菌活菌数应大于（或等于）110 CFU/mL或110 CFU/g，并定义了食品用益生菌为可用于食品中的一种或多种益生菌,经发酵、富集、干燥或不干燥、混合或不混合、包装等工序制成的食品原料。通则对食品用益生菌的评价要求进行了系统的阐述，要求应在菌株水平进行鉴定、安全评价和健康作用评价5。乳酸菌（lactic acid bacterium，简称LAB)来源广泛，随着对大健康的重视，植物源乳酸菌已引起业内的关注。传统发酵蔬菜是以蔬菜为原料,利用微生物自然发酵的冷加工食品。在我国不同地区有着丰富的传统发酵蔬菜制品8。已有研究发现,不同地区的发酵蔬菜的微生物组成群落存在显著差异,但其

12、优势细菌菌群主要为乳酸菌9。因此,传统发酵蔬菜为植物源益生乳酸菌筛选提供了强大的资源库10。由于植物源乳酸菌分离难度低、容易获得,且植物源乳酸菌与动物源乳酸菌对胃肠液具有类似的抗性 2 ,所以对发酵蔬菜源益生乳酸菌的研究已成为该产业的一个热点。目前，国外对发酵蔬菜中益生菌研究较多的是韩国泡菜 13-14,而我国研究较多的是四川泡菜、东北酸菜 15,而其他地区的报道相对较少。作者从不同地区自制的传统发酵蔬菜中分离乳酸菌，对传统发酵蔬菜源乳酸菌进行了64JOURNAL OF FOOD SCIENCE AND BIOTECHNOLOGY Vol.42 IsSue 11 2023系统益生性评价及鉴定，

13、并分析了益生特性降胆固醇能力，旨在开发符合食品用益生菌要求的发酵蔬菜源益生乳酸菌。材料与方法1.1材料与试剂1.1.1样品湖南剁辣椒、湖南芥菜、云南剁辣椒、广西发酵酸笋等共计17 个样品。1.1.2对照菌株（RW）融合魏斯氏菌（Weissellaconfusa）C W Y 57 8 2 6 2：革兰氏阳性，过氧化氢酶阴性，显微镜下呈短杆状或球状，具有益生菌的基本特性，还具有富产胞外多糖的特性1.1.3CaCO,-MRS 琼脂培养基MRS 琼脂培养基1L、Ca CO;(质量浓度2 5g/L)pH6.5,121高压蒸汽灭菌2 0 min。1.1.4MRS-CHOL肉汤培养基蔗糖酯0.1g,胆固醇0

14、.1g，牛胆盐0.2 g，吐温8 0 1mL，加冰乙酸5mL，搅拌均匀，超声溶解趁热过0.45m滤膜到1LMRS肉汤培养基中,pH6.07.0,121高压蒸汽灭菌2 0 min。1.1.5氨基酸脱羧酶培养基MRS琼脂培养基1L,组氨酸、酪氨酸、赖氨酸、精氨酸、鸟氨酸等1g/L,溴甲酚紫0.0 6 g/L,pH5.56.5,121高压蒸汽灭菌20 minl17。1.1.6试剂胆固醇、蔗糖酯、抗生素：源叶生物科技有限公司；邻苯二甲醛、组氨酸、酪氨酸、鸟氨酸、精氨酸、赖氨酸：国药集团化学试剂有限公司；MRS肉汤培养基、MRS琼脂培养基、PCA琼脂培养基：广东环凯微生物科技有限公司；胃蛋白酶（酶活2

15、50U/mg）、胰酶（酶活2 50 U/mg）：南京都莱生物技术有限公司；牛胆盐：上海麦克林生化科技有限公司。1.21仪器与设备DHP120恒温培养箱：上海实验仪器厂有限公研究论文杜秋，等：发酵蔬菜源食品用益生乳酸菌的筛选及降胆固醇能力评价司;HY45恒温摇床：深圳汇成科技有限公司；LDZX-50KBS立式高压灭菌锅：上海申安医疗器械有限公司；CX23光学显微镜：日本Olympus公司；ReadMax1900光吸收型全波长酶标仪：上海闪谱生物科技有限公司；TG16-WS台式高速离心机：湖南湘仪实验室仪器开发有限公司。1.3乳酸菌的分离鉴定1.3.1乳酸菌的分离及形态学鉴定取10 g样品加人90

16、 mL无菌生理盐水中，摇匀后取适宜梯度稀释液10 0 L均匀涂布于CaCO3-MRS琼脂培养基上，37 倒置培养3d。选取不同菌落形态且溶钙圈较大的单菌落划线至MRS固体培养基上，反复划线纯化，通过革兰氏染色筛选出符合乳酸菌条件的菌株。初筛得到的乳酸菌保存于含体积分数40%甘油的MRS肉汤培养基中，于-2 0 冷冻保存。1.3.2乳酸菌耐酸耐胆盐能力参考刘璐等的方法加以修改 8 ,将传代3代的实验菌株以体积分数3%分别接种于pH值为2.0、质量浓度为3g/L牛胆盐的MRS肉汤培养基中,立即取样测6 0 0 nm处的吸光度，剩余混合液于37、12 0 r/min振荡培养，12h时取样,测定6 0

17、 0 nm处的吸光度Ai,存活率按式(1)计算。R,=1100%Ao式中:Ri为菌株耐酸/耐胆盐存活率,%;A1为12 h样品的吸光度;A。为0 h样品的吸光度。1.4孚乳酸菌的生物特性评价1.4.1对条件致病菌的抗活性用琼脂孔扩散法测定待测菌株的抗菌活性，以大肠杆菌（E.coli）、金黄色葡萄球菌（S.aureus）枯草芽孢杆菌（B.subtilis）为指示菌。指示菌(10 7 CFU/mL)与无菌PCA琼脂培养基以1:10 充分混匀后倒入放有多个无菌牛津杯的平板中,待加有病原菌的 PCA琼脂培养基冷却凝固后，用无菌镊子取出牛津杯，即形成若干琼脂孔。分别向琼脂孔里加人10 0 L待检菌(10

18、 7 CFU/mL)的离心上清液于90 0 0 r/min离心5min,37培养12h,游标卡尺测量抑菌圈直径 19。1.4.2乳酸菌对胃/肠模拟液耐受性实验永涛等的方法制备人工胃/肠液 2 0 。将活化至3代的菌液,用无菌PBS(pH7.0)清洗3次(8 0 0 0 r/min离心10 min）,用PBS(pH7.0)反复吹打菌泥，混匀，制成供试菌悬液(110 CFU/mL)。移取1 mL菌悬液接种于9 mL人工胃液中,混匀,立即取样通过平板计数法测定其活菌数No，剩余混合液置于37 恒温培养箱中培养,3h时取样测定其活菌数N1。将在模拟胃液中孵育3h后的菌液，取1mL接种于9mL人工肠液中

19、,混匀，立即取样平板计数测定其活菌数No，剩余混合液于37 培养3h后取样测定其活菌数Ni,存活率按式(2)计算。Nx100%R2-No式中：R2为人工胃/肠液存活率，%;Ni为人工胃液/肠液处理3h后LAB的活菌数,CFU/mL;N。为人工胃液/肠液处理0 h后LAB的活菌数,CFU/mL。1.5乳酸菌的安全性评价1.5.1抗生素耐药性安全性评价将纯化培养后的乳酸菌菌液浓度调整为110 CFU/mL,取10 0 L菌液涂布于MRS固体培养基，待菌液吸收后放置药敏纸片，37 培养2 4h。每组重复3次，记录抑菌圈直径，根据表1进行药物敏感性判定。表1微生物药物敏感实验执行标准Table 1Cr

20、iteria for microbial drug susceptibility test抗生素名称(ug/片）四环素30(1)氯霉素氨芋西林万古霉素庆大霉素卡那霉素链霉素红霉素克林霉素耐存率按式(3)计算：R:=-x100%No式中:R3为乳酸菌耐药率,%;Ni为耐药和中介菌株总数,CFU;N。为实验菌株总数,CFU。1.5.2乳酸菌-溶血实验将供试菌株点接于脱验参考费纤维绵羊血琼脂平板上，以金黄色葡萄球菌为对照,37 培养2 4h后观察菌落是否具有溶血现象。1.5.3乳酸菌氨基酸脱羧酶活性实验将乳酸菌点接在氨基酸脱羧酶培养基上,37 培养2 4h后观察菌落周围颜色变化，若培养基变成紫色，即

21、氨(2)规格/抑菌圈直径/mm耐药R中介1敏感S1415183012101330141012301310111513201419131718141617151617131415141718121415142223152021(3)食品5生物技术学报2 0 2 3年第42 卷第11期65DU Qiu,et al:Screening and Evaluating with Cholesterol-Lowering AbilityRESEARCHARTICLEof Probiotic Lactic Acid Bacteria for Food from FermentedVegetable基酸脱羧酶

22、活性阳性,则具有潜在产胺威胁;若为黄色，即氨基酸脱羧酶活性阴性，该乳酸菌无潜在产胺威胁。1.6乳酸菌的降胆固醇能力评价参考余萍等 2 1 的方法稍做修改，将活化3代后的乳酸菌调节菌浓度为110 CFU/mL,按体积分数3%接种至MRS-CHOL培养基中,37 培养48 h后，90 0 0 r/min离心5min，取上清液，采用邻苯二甲醛比色法测定550 nm处的吸光度，胆固醇去除率见式(4)。R,=-4g-ALx100%A。式中：R4为胆固醇去除率,%;A。为未接种菌株培养48h后离心上清液的吸光度；A1为接种培养48 h后离心上清液的吸光度。1.7乳酸菌对Caco-2细胞黏附能力评价参考郭志

23、华等的方法，将Caco-2细胞密度调整为110 5CFU/mL，并分装于2 4孔培养板中培养至单层细胞待用 2。取2 mL待测菌液(10 CFU/mL)于9000r/min离心5min,用2 mLDMEM培养基将菌体重悬并进行菌落计数（Mo）,剩余混合液取2 0 0 L加人2 4孔板中，于37、体积分数5%CO,孵育1 h后用PBS(pH 7.0)清洗细胞表面未黏附的乳酸菌,加人2 mL胰酶消化5min后用2 mLDMEM培养基重悬并进行活菌计数(M)。黏附率按照式(5)计算。乳酸菌活菌计数参照申文熹等的方法进行菌落计数 2 。Rs=M1100%Mo式中:Rs为乳酸菌黏附率,%;M为黏附的乳酸

24、菌的菌落总数,CFU/mL;M为待测重悬液菌落总数,CFU/mL。1.8乳酸菌的分子生物学鉴定1.8.1菌株鉴定将乳酸菌纯化3代后委托杭州联川生物有限公司进行16 SrDNA测序鉴定。1.8.2同源性分析利用BlAST网站(https:/blast.(4)ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)找到与鉴定菌株同源性最高的菌株并下载序列，使用MEGA7软件构建系统发育树。1.9数据分析分析、计算、图表绘制分别采用DPS数据处理软件和OriginPro2021(64-bit)软件。各实验组重复3次,以平均值标准差(xs)表示。2结果与分析2.1乳酸菌的初步筛选结果传统发酵蔬菜样品经过

25、菌种分离纯化，筛选出革兰氏阳性的9 6 株溶钙菌株,初筛判断为乳酸菌。部分菌落形态与镜检结果见图1。(5)JCSMC-1Fig.1 Colonial morphology and gram staining results of LAB2.2乳酸菌对酸和胆盐耐受特性益生菌需要到达肠道才能发挥其益生功能。益生菌从口腔到人体肠道的过程中需要耐受胃中的低pH环境 2 3,以适应小肠中胆盐胁迫 2 4 等不良环境 2 5。因此,具有耐受人体胃肠道环境的抗逆能力已经成为评价益生菌的一项重要指标 2 。作者将初筛获得的菌株依次在pH2.0和质量浓度3g/L牛胆盐SYD图1乳酸菌菌落形态及革兰氏染色结果的M

26、RS液体培养基中处理12 h进行筛选。如图2（a）所示，96 株乳酸菌经pH2.0培养12 h后得到2 5株乳酸菌且存活率在6 5%以上，其中有10 株菌活菌数较之前有所增加,表明耐酸能力强。2 5株耐酸乳酸菌经质量浓度3g/L牛胆盐处理12 h后，有2 4株乳酸菌能存活,存活率在35%以上,见图2(b)。表明这2 4株菌对酸和胆盐具有良好的耐受性。XSMC-1SYBJCSMC6-266JOURNAL OF FOOD SCIENCE AND BIOTECHNOLOGY Vol.42 IsSUe 11 2023研究论文杜秋，等：发酵蔬菜源食品用益生乳酸菌的筛选及降胆固醇能力评价160140120

27、100%/本80604020菌株（a）2 5株乳酸菌的耐酸性(pH2)8060%/率4020菌株（b）2 5株乳酸菌对3g/L胆盐耐受性图2 乳酸菌的耐酸性及胆盐耐受性实验结果Fig.2 Acid tolerance and bile salt tolerance tests results of LAB2.3生物特性评价2.3.1抑菌实验乳酸菌可以抑制病原菌的生长繁殖,有助于胃肠道环境健康 2 7 。2 4株乳酸菌对病原菌抑菌能力的检测结果见表2。37 培养12 h后，有2 2 株菌株对金黄色葡萄球菌有显著抑菌效果，平均抑菌直径为（30.6 0 0.46）mm;所有菌株对枯草芽孢杆菌都有抑菌

28、效果，平均抑菌直径为（19.8 7 0.30）m m。表明大多数乳酸菌对所选择的革兰氏阳性病原菌具有显著抑菌效果。多数菌株对大肠杆菌也具有抑菌效果，平均抑菌直径为（12.2 0 0.35）m m，表明实验菌株对大肠杆菌抑菌能力一般。值得注意的是，菌株SY4、SY 32、JC3-1、JCM C、JC4-1对大肠杆菌没有抑菌效果，菌株JCSMC-3、JCSMC16对金黄色葡萄球菌没有抑菌效果；而其余17株菌株对3株病原菌均有抑菌效果,表明其抑菌谱较广且抑菌能力更强。食品5生物技术学报2 0 2 3年第42 卷第11期67DU Qiu,et al:Screening and Evaluating w

29、ith Cholesterol-Lowering AbilityRESEARCHARTICLEof Probiotic Lactic Acid Bacteria for Food from FermentedVegetable表2 乳酸菌对病原菌的抑菌直径Table 22 Inhibition zone diameter of LAB against pathogenic bacteria菌株大肠杆菌SY4SYASY32SYDSY31SYBXSMC2-5XSMC1XSMC2-2XSMC2XSMC2-3JC3-1JCMCJC4-2JC33-1JC-1JCMRS1JC4-1JCSMC-2JCSMC

30、-3JCSMC16JCSMC-1JCSMC20JCSMC6-2注：“一 表示无抑菌圈。2.3.2模拟胃肠液耐受特性评价消化过程中,除了受低酸和胆盐的影响，各种消化酶也会影响乳酸菌最终到达肠道的活菌数 2 8-2 。作者以RW为参考，测定2 4株乳酸菌在模拟胃/肠液中的存活情况。由表3可知,2 4株菌株在模拟胃液中处理3h均能存活，但其存活能力存在差异。菌株SY4、JC 33-1、XSM C 1、JC-1在模拟胃液中存活率较高,均大于10 0%。菌株SY32、JC 4-1、SY 31、JC M C、SYA、JCSM C-2、XSM C2-2、SY D、JCSM C16 在模拟胃液中的存活率(55

31、.8 3%8 7.6 4%)高于RW的存活率（48.8 0%）。其余11株的存活率低于融合魏斯菌,其中XSMC2-3的存活率最低（3.0 8%），但活菌数仍高于10 CFU/mL。24株实验菌株经模拟肠液处理3h后，除菌株SY31和JCSMC-2对模拟肠液无耐受能力，其余菌68JOURNAL OF FOOD SCIENCE AND BIOTECHNOLOGY Vol.42 IsSue 11 2023单位mm金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌26.030.6517.200.3812.630.2331.540.7735.130.3212.170.2928.700.0511.470.4528.170.841

32、2.000.5034.690.6111.120.0831.830.5211.000.7330.000.1011.830.2932.000.2012.070.6830.310.5614.330.0833.170.6230.000.0135.330.2913.000.1230.000.0112.000.5133.300.6112.000.0124.000.5810.780.7326.000.8932.000.2013.330.0830.000.0211.540.5011.670.2814.320.0813.670.2510.850.74乳酸菌在胃肠16.200.3222.300.0125.000.

33、6122.000.0123.000.7816.690.2525.650.0523.000.2818.230.0119.310.1716.300.0319.540.8922.100.6120.500.5319.850.0212.300.0521.300.3119.860.0116.490.3617.210.9629.170.6926.500.2828.960.9515.320.3632.900.5321.050.01株对模拟肠液均表现出不同程度的耐受能力，见表3。其中菌株XSMC2-3耐受能力较弱,活菌数仅有7.55105CFU/mL，表明菌株XSMC2-3受到模拟肠液的影响较大。2.4安全性评

34、价通过对实验菌株的生物特性评价，选择抑菌谱较广、抑菌能力较强且对胃肠道环境耐受能力强的18株乳酸菌进行安全性评价。18 株菌株对9 种抗生素的耐药性检测结果见表4。18 株乳酸菌对四环素、氯霉素、氨苄西林、红霉素具有敏感性；对万古霉素、庆大霉素、卡那霉素、链霉素具有耐药性。据报道,多数乳酸菌对糖肽类(万古霉素)和氨基糖苷类（庆大霉素、卡那霉素和链霉素）的抗生素具有天然耐受能力 30-31。克林霉素主要是通过抑制细菌蛋白质合成从而达到抑菌效果 32,因此35%的供试菌研究论文杜秋，等：发酵蔬菜源食品用益生乳酸菌的筛选及降胆固醇能力评价表3乳酸菌在人工胃肠液中的活菌数及存活率Table3Viabl

35、e count and survival rates of LAB in artificial gastrointestinal fluids模拟胃液模拟肠液菌株oh活菌数/(CFU/mL)RW8.30108SY43.40108SYA3.97108SY324.45108SYD3.40108SY314.06108SYB5.00108XSMC2-54.74108XSMC-15.00108XSMC2-22.23108XSMC24.85108XSMC2-32.34108JC3-13.91108JCMC1.79108JC4-24.40108JC33-12.27108JC-12.74108JCMRS11.

36、89108JC4-12.63108JCSMC-25.12108JCSMC-32.69108JCSMC162.83108JCSMC-12.55108JCSMC202.27108JCSMC6-23.39108注：一表示未检出乳酸菌活菌数。株的蛋白质合成不受克林霉素抑制，表现出耐药性。18 株供试菌株均无溶血现象且在氨基酸脱羧酶培养基上呈阴性，表明这18 株试验菌株均为安全菌株。2.5益生乳酸菌降解胆固醇能力评价由图3可知，18 株乳酸菌培养48 h后胆固醇的去除率均大于40%。对照菌株RW培养48 h后胆固醇去除率达到54.56%。除JC4-1、JCSM C16、JC33-1、JC SM C-3、

37、XSM C 2-2 外其余13株菌株的胆固醇去除率则高于RW的胆固醇去除率，其中菌株3h活菌数/(CFU/mL)4.0510859.01073.041083.901082.001083.321081.271088.121079.10 x1081.541083.581077.201061.671081.43x10s6.131073.471082.98x1087.001072.241083.78x1089.601071.58x1089.801071.10 x1081.07108Oh活菌数/存活率/%(CFU/mL)48.805.05107173.533.6510776.572.9210787.64

38、1.7110758.821.76x10781.77一25.401.7210717.132.01107182.001.0610769.061.291077.386.051063.082.56x10642.716.8510679.891.36x10713.939.70106152.861.87107108.762.2410737.044.2510685.172.3110773.83一35.699.2010655.831.6310738.431.0510748.462.06x10731.561.01107SYD的胆固醇去除率高达6 2.54%。2.6益生乳酸菌对Caco-2黏附能力的评价13株降胆固

39、醇益生乳酸菌对Caco-2细胞的黏附率见图4。有9 株乳酸菌对Caco-2细胞的黏附率高于对照菌株RW的黏附率（6 2.10%），其中菌株SYB的黏附率高达8 1.7 4%;余下菌株的黏附率均低于RW的黏附率(6 2.10%），但均在45%以上。黏附性强的乳酸菌更容易在肠道中定植33-3,从而发挥益生作用。故选择黏附率前5名的菌株进行鉴定。食品5生物技术学报2 0 2 3年第42 卷第11期693h活菌数/(CFU/mL)1.701071.701071.26x1071.421071.92107一3.051077.441061.011073.151063.271067.551054.241066

40、.751067.701064.321062.921068.551066.74106一6.721067.56x1065.071063.041065.30106存活率/%33.6646.5843.1583.04109.09一177.3337.0195.2824.4254.0529.4961.9049.6379.3823.1013.04201.1852.25一73.0446.3848.2914.7652.48DU Qiu,et al:Screening and Evaluating with Cholesterol-Lowering AbilityRESEARCHARTICLEof Probioti

41、c Lactic Acid Bacteria for Food from FermentedVegetable表4乳酸菌对不同抗生素的耐药性Table4Resistance of LAB to different antibiotics菌株四环素氯霉素氨芋西林万古霉素庆大霉素卡那霉素链霉素XSMC2-2SSYDSJCSMC-1SJCSMC6-2SJCMRS1SSY32SJC4-2SJCMCSSYASSYBSSY4SJC-1SJCSMC-3SJC3-1SXSMC-1SJC33-1SJC4-1SJCSMC16SRWS耐药率/%0注：“S表示敏感；“T表示中介；R表示耐药。706050%/率4030

42、2010OLFig.3Rate of cholesterol removal by LAB2.7乳酸菌16 SrDNA分子鉴定结果通过构建的系统发育树获得同源菌株信息见表5。可知菌株JCSMC-1与植物乳植杆菌(Lactiplantibacillus plantarum),菌株 SYB、JCSM C6-70JOURNAL OF FOOD SCIENCE AND BIOTECHNOLOGY Vol.42 IsSue 11 2023红霉素克林霉素SSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSS00菌株图3乳酸菌的胆固醇降解率RRRRRRRRRRRRRRRRRRR100R

43、RRRRRRRRRRRRRRRRRR10090807060%/率圳鞋40302010JC4-2JCSMC-1JCSMC图4乳酸菌对Caco-2细胞的黏附作用Fig.4Adhesion of LAB to Caco-2 cells2与植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum），菌株SYD、XSM C-1与副干酪乳酸菌（Lacticaseibacillusparacasei)的亲缘关系分别最近,且序列相似性均高达10 0%。RRRRRRRRRRRRRRRRRRR10026RRRRRRRRRRRRRRRRRRR100菌株SSSSSSSSSSSSSSSSSSS100JCMISSSS1

44、R1ISSSRSSSSSS35研究论文杜秋，等：发酵蔬菜源食品用益生乳酸菌的筛选及降胆固醇能力评价草芽孢杆菌具有一定的抑菌效果,且在绵羊血培养基均没有溶血现象,经氨基酸脱羧酶培养基检测表明没有产生物胺的潜在威胁；5株菌株对所选用的表5乳酸菌鉴定结果Table5Identificationof LAB菌株登录号JCSMC-1CP055123.1LactiplantibacillusplantarumSYDCP039707.1SYBAP019815.1XSMC-1CP039707.1JCSMC6-2AP019815.13结语本研究筛选得到的5株发酵蔬菜源益生乳酸菌 JCSMC-1、SY B、JCS

45、M C6-2、SY D、XSM C-1 具有较好的胆固醇去除能力（45.55%6 2.54%）。同时，对酸、胆盐和模拟胃/肠液耐受性强,对Caco-2细胞黏同源附性也强；另外,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯相似菌种性/%100Lacticaseibacillus paracasei100Lactobacillusplantarum100Lacticaseibacillus paracasei100Lactobacillusplantarum1006种抗生素表现出敏感性,3种(1种糖肽类、2 种氨基糖苷类)抗生素表现出耐药性,这可能是乳酸菌对糖肽类和氨基糖苷类抗生素具有天然耐受能力；经16 Sr

46、DNA鉴定，菌株JCSMC-1为植物乳植杆菌,SYB、JC SM C 6-2 为植物乳杆菌,SYD、XSM C-1为副干酪乳酸菌。综上所述，5株菌株可作为潜在的食品用益生菌，进一步用于功能性乳制品的开发。参考文献：1段云峰，蔡峰，律娜，等，益生菌促进胃肠道健康的机制及应用 1 微生物学报，2 0 2 2,6 2(3)：8 36-8 47.DUAN Y F,CAI F,LYU N,et al.The mechanism and application of probiotics in promoting gastrointestinal healthJJ.ActaMicrobiologica S

47、inica,2022,62(3):836-847.(in Chinese)2 J HILL C,GUARNER F,REID G,et al.The international scientific association for probiotics and prebiotics consensus statement onthe scope and appropriate use of the term probioticJJ.Nature Reviews Gastroenterology&Hepatology,2014,11(8):506-514.3】吴蜀豫，冉陆.FAO/WHO食品益生

48、菌评价指南 J.中国食品卫生杂志，2 0 0 3,15(4)：37 7-37 9.WU S Y,RAN L.FAO/WHO guidelines for the evaluation of food probioticsJJ.Chinese Journal of Food Hygiene,2003,15(4):377-379.(in Chinese)【4 中国食品科学技术学会益生菌分会.益生菌功效性研究与评价的科学综述 1.中国食品学报,2 0 2 3,2 3(5):444-455.Probiotics Branch of Chinese Society of Food Science and

49、 Technology.A scientific review of research and evaluation ofprobiotics efficacyJJ.Journal of Chinese Institute of Food Science and Technology,2023,23(5):444-455.(in Chinese)5张国华，田慧颖，何国庆.益生菌安全性与功能性评价方法研究进展 .山西农业科学,2 0 2 2,50(11)：150 5-1510.ZHANG G H,TIAN H Y,HE G Q.Research progress on evaluation me

50、thods of probiotic safety and functionJ.Journal ofShanxi Agricultural Sciences,2022,50(11):1505-1510.(in Chinese)6关倩倩，熊涛,谢明勇.植物基食品乳酸菌发酵技术研究进展 J.食品与生物技术学报,2 0 2 2,41(7)：1-11.GUAN Q Q,XIONG T,XIE M Y.Research progress in lactic acid bacteria fermentation technology of plant-based foods J.Journal of Fo