1、课题类别卫生厅编号湖南省医药卫生科学技术研究课题计划（合同）申 请 书课题名称：脑脊液中-淀粉样蛋白和tau蛋白的正常值及临床意义的研究 湖南省卫生厅一九九三年十月制简 表研究课题名称(25字内)脑脊液中-淀粉样蛋白和tau蛋白的正常值 及临床意义的研究 类别A.重点 B.一般 C.青年基金申请金额 2万元起止年月起2002年10月止 2003年9月申请者姓名性别男出生年月 1966年7月专业技术职务主治医师学位博士所在部门工作单位名称所在地性质A.高等院校 B.医疗卫生单位 C.科研单位 D.其它课题组总人数高级中级初级辅助人员博士硕士学士参加单位数52212211 课题组主要成员含负责人姓
2、名年龄专业技术职务年参加月数工作单位项目中的分工签章35主治医师全程负责44副主任医师全程协作40主任医师全程负责31主管技师全程协作28医师全程协作-1-研究内容和意义摘要200字内脑脊液中-淀粉样蛋白（-Amyloid Protein, -AP，A）是淀粉样前体蛋白（APP）在分泌酶的作用下裂解出来的含有40-43个氨基酸的蛋白质，脑脊液中A有A40和A42两种形式；两者在正常老年人和Alzheimer病（AD）脑脊液中均存在，A42与AD老年斑形成密切相关。Tau蛋白是脑细胞内的一种功能蛋白，有形成细胞骨架、组装和稳定微管的作用。正常脑细胞内Tau蛋白磷酸化位点很少，因而不易被磷酸化，脑
3、脊液中Tau蛋白的含量较少。AD患者脑细胞内Tau蛋白磷酸化位点增多，Tau蛋白呈异常磷酸化，脑脊液中Tau蛋白的含量增多。本研究拟采用放射免疫法检测不同年龄段人群（包括痴呆和非痴呆）脑脊液40、A42和Tau蛋白含量，通过大样本的分析，界定其参考正常值范围，为Alzheimer病的诊断提供可靠的实验室依据。脑脊液中-淀粉样蛋白（-Amyloid Protein, -AP，A）是淀粉样前体蛋白（APP）在分泌酶的作用下裂解出来的含有40-43个氨基酸的蛋白质，脑脊液中A有A40和A42两种形式；两者在正常老年人和Alzheimer病（AD）脑脊液中均存在，A42与AD老年斑形成密切相关。脑脊液
4、中-淀粉样蛋白（-Amyloid Protein, -AP，A）是淀粉样前体蛋白（APP）在分泌酶的作用下裂解出来的含有40-43个氨基酸的蛋白质，脑脊液中A有A40和A42两种形式；两者在正常老年人和Alzheimer病（AD）脑脊液中均存在，A42与AD老年斑形成密切相关。-2-一 本研究的立项依据和目标本课题研究的意义及同类研究工作国内外研究现状与存在问题，列出主要参考文献随着社会人口逐步进入老龄化阶段，Alzheimer病（AD）已成为人类的第四大死因。AD的研究具有重要的经济意义和社会意义。目前AD的诊断主要靠临床表现、神经心理学测试和影像学检查，缺乏客观的实验室诊断依据。AD的基本
5、病理变化是老年斑和神经元纤维缠结，前者的主要成分是淀粉样蛋白（A），后者的主要成分是Tau蛋白。AD患者脑脊液中A水平是增高还是降低，各家报道不一致1-4。其原因主要与没有分别测定A40、A42和总A有关；且因均采用ELASA法，测出的结果受主客观影响较大，致使A测定的应用价值降低。AD患者脑脊液Tau蛋白水平是增高的，国内外报道是一致的5-6。由此推断：脑脊液Tau蛋白和A联合测定可能会提高实验室诊断AD的应用价值。虽然，国外新近有脑脊液Tau蛋白和A正常值的报道7 ，但目前尚无国人脑脊液Tau蛋白和A的参考正常值。界定国人的脑脊液Tau蛋白和A的参考正常值可为Alzheimer病的诊断提供
6、可靠的实验室依据。参考文献1 丁新生，程虹，张雪玲，等。脑脊液中淀粉样蛋白检测对老年期痴呆的诊断意义。临床神经病学杂志，2001，1：3-5。2 吴恺，胡刚，国泓，等。Alzheimer病患者脑脊液淀粉样蛋白的检测。中华老年医学杂志，1999，1：13-15。3 王磊，袁锦楣，郝洪军，等。Alzheimer病血清和脑脊液-淀粉样蛋白的测定。中国神经精神疾病杂志，1999，2：102-103。4 Kanai M,Matsubara E,Isoe K,et al.Longitudinal study of cerebraospinal fluid levels of tau, A1-40,A1-4
7、2(43) in Alzheimers disease:A stady in Japan,Ann Neurology,1998,44:17-26.5 王琨，丁新生，程虹。阿尔茨海默病患者脑脊液Tau、A1-40、A1-42（43）蛋白测及其临床意义。徐州医学院学报，2000，2：109-112。6 Shoji M,Matsubara E,Kanai M,et al.Combination assay of CSF tau , A1-40 and A1-42 as a biochemical marker of Alzheimers disease.J Neurol Sci ,1998,2:13
8、4-140.7 Sjogren M,et al .Tau and Abeta42 in cerebrospinal fluid from healthy adults 21-93 years of age:establishment of reference values .Clin Chem 2001;47(10):1776-81.-3-2研究内容、研究目标和拟解决的关键问题研究内容、研究目标： 本研究拟通过对不同年龄段非AD和AD病人脑脊液中 A40、A42和Tau蛋白的检测，确定脑脊液中A40、A42和Tau蛋白的参考正常值。为AD的诊断提供实验室依据。拟解决的问题：理论上说，只有痴呆患
9、者（包括AD性和非AD性）的脑脊液A和Tau蛋白异常，正常人、非神经系统疾病患者和非痴呆神经系统疾病患者脑脊液中A40、A42和Tau蛋白含量是一致的。但为证实这一理论，先将非痴呆组分为正常人、非神经系统疾病患者和非痴呆神经系统疾病三个亚组的脑脊液分别检测，如这一理论得到证实，则将这三个亚组的脑脊液A和Tau蛋白的含量视为正常人的含量来分析，以增加样本量，克服真正的正常人脑脊液来源不足的弊端。 -4-3本课题的特色和创新之处及立论根据（与国内外类似研究比较） 脑脊液是存在于脑室及蛛网膜下腔内的一种无色透明液体，脑细胞的代谢产物可释放到脑脊液中，脑脊液中成分的变化一定程度反应了脑细胞的活动情况。
10、脑脊液取材操作简单，放射免疫法检测受主观干扰因素少，结果可靠。 目前，国内外关于脑脊液A和Tau蛋白检测的报道主要是对已确诊为痴呆的研究，对非痴呆患者脑脊液Tau蛋白和A的检测的报道甚少。本课题拟通过对非痴呆患者的不同人群脑脊液A和Tau蛋白含量的研究，界定其参考正常值，为确诊AD提供实验室依据。 4研究工作的预期结果或成果 预期通过对不同年龄段的非痴呆人群脑脊液Tau蛋白和 A的检测，界定其人群的参考正常值。 -5-5本课题的情报查新情况及结论 检索关键词（个）： 检索年限（前3年以上）： 检索刊物名称（至少有种系国外刊物）： 检索手段（光盘、手工、其它）： 检索结论： 检索机构及检索人盖章
11、-6-二、研究方法和路线、 拟采取的研究实验方法、步骤、技术路线及可行性、可靠性论证方法、步骤、技术路线：1） 脑脊液的收集：包括所有行腰穿（神经内科和非神经内科住院患者）时的脑脊液，除外有明显出血的脑脊液，经离心沉淀后分管于-20冰箱中保存待测。根据痴呆的临床诊断标准分为痴呆组和非痴呆组，然后再分亚组。详见表。 AD 痴呆组- 非AD 正常人 非痴呆组-非神经系统疾病 非痴呆神经系统疾病 2） 选用相应的试剂合，用放射免疫法测定。3） 实验数据的分析、处理。4） 书写论文。可行性、可靠性论证： 1） 腰穿留取脑脊液化验检查是神经内科诊断疾病常用的方法，因而收集足够的脑脊液是可行的。2） 本院
12、核医学科有一流技术的医技人员和成套设备，能够完成该科题的实验检测。3） 试剂合可在国内外生物技术公司购买。 -7-2、研究工作的总体安排及进度： （1）2002年10月-2003年3月 规范实验程序，收集标本。（2）2003年4月-2003年6月 购买试剂，实验阶段。（3）2003年7月-2003年9月 实验数据处理，结果分析，撰写论文。-8-三、实现本课题预期目标已具备的条件1与本课题有关的研究工作基础 本研究负责人在读硕士研究生期间（1997.92000.7）曾参加国家“九五”攻关课题Alzheimer病的流行病学调查，与该课题密切相关。2实现本项研究已有的主要仪器设备，尚缺的仪器设备及解
13、决途径本院核医学科有成套的仪器设备，已开展放射免疫检测多年，不缺任何仪器设备，只需购买相应的试剂合。3课题负责人及主要成员的学历和研究工作简历，已取得的主要科研成就 4不需动物实验-9-四、申请课题经费预算预算支出科目金额（万元）计算根据及理由合计21、科研业务费2、实验材料费3、小型土建安装费4、协作费0.510 0.5调研费 万元；业务交流费 万元；培训费 万元。编程软件材料费 万元；资料、书籍购买费 万元直接主管部门开户银行及帐号：主要研究单位开户银行及帐号-11-五、合作单位意见（一）同意申请书的内容并做到：1、保证参加合作研究的人员、物力和时间：2、督促课题参加者按计划完成所承担的研
14、究工作，并按时报送有关报表（二）需要说明的其它问题：合作单位1（公章）合作单位2（公章）合作单位3（公章）合作单位4（公章）-12-六、申请单位学术委员会审查意见（对本课题的意义特色和创新之处，研究方法的先进性、可行性及研究者素质水平等签署意见）本研究课题紧密联系临床，研究人群脑脊液的A和Tau蛋白的参考正常值，为AD的诊断提供客观的实验室依据。课研思路清晰，研究方法先进，论证可行，在国内属首创。主任或副主任委员（签字） 年 月 日七、申报单位领导审核意见（一） 同意学术委员会的意见并做到以下几点：1、保证研究计划实施所需的人力，物力和工作时间等条件；2、督促课题负责人严格执行计划进度安排3、
15、督促课题负责人按时报送有关报表资料（二） 需要说明的其它问题单位领导（签章） 单位（公章） 年 月 日-13-八、推荐意见（申请青年基金课题需填写此栏由两名同行高级科技人员填写，推荐意见要说明课题的意义和取得预期成果的可能性，申请者和课题组的学术水平及研究能力，现有工作条件等）推荐人（签字） 专业技术职务 专长 单位推荐人（签字） 专业技术职务 专长 单位-14-主管部门审核意见委托单位组织同行评议或情报咨询意见：卫生厅审批意见：-15-合 同 条 款1本研究课题为期 年。从 年 月起，到 年 月止。实验、临床、现场等研究工作结束后二至三个月内， 乙 方应向 方提出科研总结或申请成果 的完总资
16、料。2本课题确定为 偿拨款。由甲方资助经费总额 元，分 次拔完，完成全部合同任务。其中按协议应偿还的 元，于 年内 分次还清。3所 签定的此项合同课题，乙方不得另向其它部门或单位申报计划。如向省科委、卫生部等上一级主管部门申报时，应通过甲方协同办理。4合同执行过程中，如因不可抗拒的客观原因，确需调整合同期限和内容时，乙方必须及时提出书面报告，报请甲方审批备案，方能生效。5合同执行过程中，乙方应于每半年向甲方汇报一次进展情况，整个合同完成时，及时向甲方申请验收。申请任何一项科研成果奖励时，有关文件、资料应注明为 方合同课题。6乙方对科研资料负有保密责任。其研究成果未经专家鉴定或未经 方同意，不得
17、对外提供成公开发表具有保密价值的关键资料、数据（包括某些诀窍、方法）。7乙方拟将成果转让成开发时需征得甲方同意，凡有经济效益者，需提纯利润的百分之三十为 方扩大科研基金费。8凡未被甲方认可的理由，不如期按要求完成合同任务者，进行文字通报。如乙方仍未采取新的有效措施保证完成，或要求终止合同时，甲方将采取措施追回部分或全部科研以费，并在二至三年内不受理课题负责人的科研任务。签定合同各方签字委托单位（甲方）负责人 年 月 日委托单位（乙方）：单位负责人：课题负责人 年 月 日保证单位（丙方）：（系指各附属医院及地市所属单位的主管部门）负责人 年 月 日-16-合同执行过程中有关事项记载时 间 内容摘要-17-
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