1、MDCK MDCK 细胞流感疫苗的细胞流感疫苗的安全性安全性Solvay PharmaceuticalsSolvay PharmaceuticalsPresentation to VRBPACPresentation to VRBPACNovember 16, 2005November 16, 2005MDCK 细胞流感疫苗的安全性Solvay Pharmac2目录 Solvay Solvay 公司的背景和流感疫苗公司的背景和流感疫苗 SolvaySolvay公司开发公司开发MDCK MDCK 流感疫苗的计划流感疫苗的计划 MDCKMDCK细胞疫苗的安全性细胞疫苗的安全性 结论结论2目录Sol
2、vay 公司的背景和流感疫苗3Solvay Pharmaceuticals简介 Solvay Solvay 药业是药业是 Solvay Group Solvay Group的一部分的一部分 名列全球前名列全球前4040家的大药厂家的大药厂 有有12,800 12,800 员工员工 2004 2004 年销售额为年销售额为: 28 : 28 亿美元亿美元 研究和开发的主要地点研究和开发的主要地点 Marietta, GAMarietta, GA 法国法国:Dijon and Paris:Dijon and Paris 德国德国:Hanover:Hanover 荷兰荷兰:Weesp, :Weesp
3、, 3Solvay Pharmaceuticals简介Solva4Solvay Pharmaceuticals 和 Influenza疫苗 鸡胚流感疫苗鸡胚流感疫苗 本公司是欧洲第一家生产流感疫苗的厂家本公司是欧洲第一家生产流感疫苗的厂家 (1950)(1950) 55 55年来生产从位间断年来生产从位间断 总生产量总生产量 2.5 2.5亿剂量亿剂量 全球第四大流感疫苗供应厂家全球第四大流感疫苗供应厂家; ;超过超过 50 50 个国家个国家4Solvay Pharmaceuticals 和 Infl5Solvay Pharmaceuticals 和 Influenza疫苗SolvaySol
4、vay公司生产的鸡胚疫苗供应国家分布在全球公司生产的鸡胚疫苗供应国家分布在全球荷兰荷兰WeespWeesp流感疫苗生产设施流感疫苗生产设施美国总部美国总部Marietta, GAMarietta, GA5Solvay Pharmaceuticals 和 Infl6Why a cell-based vaccine project? 鸡胚疫苗是开放性生产系统鸡胚疫苗是开放性生产系统, ,易于污染易于污染 由于会发生禽病由于会发生禽病, ,鸡胚可能不会保证供应鸡胚可能不会保证供应 6Why a cell-based vaccine proj7为何使用MDCK细胞? 对流感病毒的敏感谱广对流感病毒的敏
5、感谱广; ; 在流感的研究和检测中有扎实的经验在流感的研究和检测中有扎实的经验 病毒产量高病毒产量高 在经济上合算在经济上合算 病毒纯度高病毒纯度高 7为何使用MDCK细胞?对流感病毒的敏感谱广;8Solvay Pharmaceuticals公司的 MDCK 细胞流感疫苗计划 已经有已经有10 10 年以上的经验年以上的经验 微载体微载体, ,无血清无血清 进行了临床前和临床开发计划进行了临床前和临床开发计划 获得荷兰的许可获得荷兰的许可 商业性生产规模设施商业性生产规模设施 将获得商业性生产许可将获得商业性生产许可, ,接着是全球许可接着是全球许可, ,包括美国包括美国8Solvay Pha
6、rmaceuticals公司的 MDC9Solvay Pharmaceuticals公司生产 MDCK疫苗的设施 荷兰荷兰Solvay PharmaceuticalsSolvay Pharmaceuticals公司公司( Weesp( Weesp城城) ) 9Solvay Pharmaceuticals公司生产 M10 细胞系的潜在性风险进行了定性和定量的检定细胞系的潜在性风险进行了定性和定量的检定 在下游生产过程中在下游生产过程中(DSP)(DSP) 量化减少了这些风险量化减少了这些风险 保留在接种者疫苗成份中保留在接种者疫苗成份中MDCKMDCK细胞的残留物的潜细胞的残留物的潜在风险进行了
7、定量在风险进行了定量CBERs Defined-Risks ApproachCBERs Defined-Risks ApproachLewis AM Jr, Krause P, Peden K. Lewis AM Jr, Krause P, Peden K. Dev Biol. 2001, vol 106, pp 513-535Dev Biol. 2001, vol 106, pp 513-535MDCK 细胞的安全性评估10细胞系的潜在性风险进行了定性和定量的检定MDCK 细胞的111. 1. 细胞系的检定细胞系的检定2. 2. 生产的下有过程生产的下有过程3. 3. 终产品的安全性终产品的
8、安全性MDCK 细胞安全性评估11细胞系的检定MDCK 细胞安全性评估12MDCK 细胞安全性评估1. 1. 细胞系的特征细胞系的特征a. a. 传代历史传代历史b.b. 可能的外来因子可能的外来因子, ,包括病原体包括病原体c. c. 致癌性致癌性12MDCK 细胞安全性评估细胞系的特征131a. 细胞系的特征 历史未污染牛海绵状(组织)脑病样的病原(Bovine Spongiform Encephalopathy-like agents)1958:从狗肾分离1964: 存放在美国ATCC1991: 在 ATCC制备日常储备 1992: 制备主细胞库和工作细胞库131a. 细胞系的特征 历史
9、1958:从狗肾分离196141a. 细胞系特征- 传代历史传代用于疫苗生产 0: 从狗肾分离49: 储存在美国ATCC52: 制备成 ATCC 工作日常储备库存97: 制备延长的细胞库56: 制备成主细胞系库57: 制备成工作细胞库传代用于安全性评估141a. 细胞系特征- 传代历史传代用于疫苗生产 0: 从151b. 细胞系特征 外源因子Adventitious agents 支原体支原体 无细菌和真菌无细菌和真菌 在试管内在检测细胞系中共培养在试管内在检测细胞系中共培养 在机体水平检测不同的种类在机体水平检测不同的种类 电镜检查电镜检查 反转录病毒检测反转录病毒检测在在SolvaySol
10、vay公司的公司的MDCKMDCK 细胞中未发现有外源性微生物细胞中未发现有外源性微生物151b. 细胞系特征 外源因子Adventitious16 特异性检测自然感染的狗病毒特异性检测自然感染的狗病毒 特异性检测对特异性检测对MDCKMDCK细胞敏感的病毒细胞敏感的病毒1b. 细胞系特征 外源因子在在SolvaySolvay公司的公司的 MDCK MDCK细胞中未发现有外来的病毒感染细胞中未发现有外来的病毒感染16特异性检测自然感染的狗病毒1b. 细胞系特征 外源因171c. 细胞系特征 致癌性 表型特征在动物模型上肿瘤形成表型特征在动物模型上肿瘤形成 疫苗成品检测疫苗成品检测 完整细胞完整
11、细胞 细胞成份残余细胞细胞成份残余细胞DNADNA 在疫苗接种者中似无同种异体移植物排斥在疫苗接种者中似无同种异体移植物排斥171c. 细胞系特征 致癌性表型特征在动物模型上肿瘤形成18 完整细胞潜在的致瘤性完整细胞潜在的致瘤性 在成熟免疫缺损的在成熟免疫缺损的4 4 周裸鼠中研究周裸鼠中研究6 6个月个月 细胞溶离液的潜在的致瘤性细胞溶离液的潜在的致瘤性 在成熟和新生的裸小鼠在成熟和新生的裸小鼠, ,新生的大鼠和新生的地鼠中观察新生的大鼠和新生的地鼠中观察6 6个月个月 DNADNA潜在的致癌性潜在的致癌性 在成熟和新生的裸小鼠在成熟和新生的裸小鼠, ,新生的大鼠和新生的地鼠中观察新生的大鼠
12、和新生的地鼠中观察6 6个月个月1c. 细胞系特征 致瘤性18完整细胞潜在的致瘤性 1c. 细胞系特征 致瘤性19 完整细胞完整细胞: : 在在4 4周裸鼠研究周裸鼠研究6 6个月个月 完全消退完全消退- - - -0/260/2610101 1 MDCK, p98 MDCK, p98sacsacsacsac10910925/2625/26阳性对照阳性对照 (10(107 7 HeLa) HeLa)23230 02 223/2623/2610107 7 MDCK, p56 (ATCC) MDCK, p56 (ATCC)4 42727282830/3030/3010107 7 MDCK, p98
13、 MDCK, p985 56 62 218/2618/2610105 5 MDCK, p98 MDCK, p98- - - -0/260/2610103 3 MDCK, p98 MDCK, p98 - - - -0/260/26阴性对照阴性对照6 mos6 mos40 days40 days瘤状物瘤状物大小大小 (mm(mm2 2) )发病率发病率1c. 细胞系特征 致瘤性19完整细胞: 在4周裸鼠研究6个月 完全消退-0/2620 完整细胞完整细胞: : 在在4 4周裸鼠周裸鼠6 6个月的研究个月的研究 注射部位注射部位瘤状物瘤状物在注射部位肿在注射部位肿瘤瘤(MDCK (MDCK 腺癌腺癌
14、) )脾脏肿瘤脾脏肿瘤(hystiocytic (hystiocytic tumor)tumor)肺部肿瘤肺部肿瘤( (腺瘤腺瘤) )阴性对照阴性对照0/260/26- - - -10101 1 MDCK, p98 MDCK, p980/260/26- -1*1*- -10103 3 MDCK, p98 MDCK, p98 0/260/26- - - -10105 5 MDCK, p98 MDCK, p9818/2618/266 6- - -10107 7 MDCK, p98 MDCK, p9830/3030/301616- -1 110107 7 MDCK, p56 (ATCC) MDCK,
15、 p56 (ATCC)23/2623/26- - -1 11c. 细胞系特征 致瘤性* * Non-MDCKNon-MDCK20完整细胞: 在4周裸鼠6个月的研究 注射部位瘤状物在注射21 10107 7 个细胞溶离液个细胞溶离液: 6: 6个月致癌性研究个月致癌性研究试验组试验组数量数量在注射部位在注射部位瘤瘤状物状物其它组织肿瘤其它组织肿瘤4w + 0-4d 4w + 0-4d 裸鼠裸鼠细胞溶离液细胞溶离液68680 00 0阴性对照阴性对照50500 00 00-7d 0-7d 地鼠地鼠细胞溶离液细胞溶离液98980 00 0阴性对照阴性对照54540 00 00-7d 0-7d 大鼠大
16、鼠细胞溶离液细胞溶离液91910 00 0阴性对照阴性对照58580 00 01c.细胞系特征 致瘤性21107 个细胞溶离液: 6个月致癌性研究试验组数量在注射22 0.1mg MDCK-DNA0.1mg MDCK-DNA: 6: 6个月致癌性研究结果个月致癌性研究结果实验组实验组数量数量在注射部位的在注射部位的瘤状物瘤状物其它组织肿瘤其它组织肿瘤4w + 0-4d 4w + 0-4d 裸鼠裸鼠0.1mg DNA0.1mg DNA48480 02 2阴性对照阴性对照48480 00 00-7d 0-7d 地鼠地鼠0.1mg DNA0.1mg DNA64640 00 0阴性对照阴性对照4848
17、0 00 00-7d 0-7d 大白鼠大白鼠0.1mg DNA0.1mg DNA69690 00 0阴性对照阴性对照39390 00 01c.细胞系特征 致瘤性220.1mg MDCK-DNA: 6个月致癌性研究结果实验23 DNADNA研究肿瘤的特征研究肿瘤的特征组织病理组织病理 1 1只鼠只鼠: : 肝脏的组织细胞瘤肝脏的组织细胞瘤 1 1只鼠只鼠: : 胸腔淋巴瘤胸腔淋巴瘤在免疫缺损裸鼠没有未意料到的自发性肿瘤在免疫缺损裸鼠没有未意料到的自发性肿瘤1c.细胞系特征 致瘤性23DNA研究肿瘤的特征1c.细胞系特征 致瘤性24追踪研究追踪研究MDCK MDCK 细胞细胞DNADNA 在裸鼠较
18、大量的研究在裸鼠较大量的研究 大白鼠胚胎和新生的安全性研究大白鼠胚胎和新生的安全性研究1c.细胞系特征 致瘤性24追踪研究MDCK 细胞DNA1c.细胞系特征 致瘤性25 剂量在剂量在 10105 5时在免疫缺损动物有中等程度的致瘤性 大部分的大部分的瘤状体瘤状体 部分消退部分消退, , 剂量在剂量在10105 5时有5/25, 105/25, 107 7 时有时有4/28 4/28 完全消退完全消退 传代数增加和传代数增加和/ /或适应于无血清培养生长时或适应于无血清培养生长时致瘤性增加致瘤性增加 在在9898代时符合代时符合 MDCK MDCK 细胞的文献记载细胞的文献记载1c.细胞系特征
19、 致瘤性总结25剂量在105时在免疫缺损动物有中等程度的致瘤性1c.细26 在免疫功能正常的动物未观察到有致瘤性在免疫功能正常的动物未观察到有致瘤性 10107 7 MDCK MDCK 细胞溶离液无致瘤性细胞溶离液无致瘤性 0.1 mg MDCK-DNA 0.1 mg MDCK-DNA 不认为是有致癌性不认为是有致癌性; ; 证实试证实试验已经启动进行验已经启动进行1c.细胞系特征 致瘤性总结26在免疫功能正常的动物未观察到有致瘤性1c.细胞系特征 27MDCK 细胞安全性评价1. 1. 细胞系特征细胞系特征2. 2. 下游工程下游工程 (DSP)(DSP) 消除完整细胞消除完整细胞 消除细胞
20、消除细胞 DNA DNA27MDCK 细胞安全性评价1.细胞系特征28MDCK疫苗生产流程28MDCK疫苗生产流程292a. DSP 消除完整细胞292a. DSP 消除完整细胞302a. DSP 消除完整细胞完整细胞完整细胞 10 10 log log 清除系数清除系数中试规模中试规模 生产规模生产规模均质化均质化- -正在确认正在确认离心离心3.63.6去污剂处理去污剂处理 3.63.6超离超离 3.63.60.220.22 过滤过滤 x3x3 3.63.6总计总计 21.421.4302a. DSP 消除完整细胞完整细胞 中试规模 生312b. DSP 消除DNABenzonaseBen
21、zonase312b. DSP 消除DNABenzonaseBen322b. DSP 消除 DNA 规格规格: 10 : 10 纳克纳克/ /剂量剂量DNA DNA 含量含量content content 清除系数清除系数中试规模中试规模生产规模生产规模DNA DNA 消化消化 1 15151证实试验正在进行证实试验正在进行 ( (包包括含量和大小括含量和大小) )DNA DNA 消化消化2 28888去污剂处理去污剂处理/ /超离超离168168全部清除全部清除760,000760,000322b. DSP 消除 DNA 规格: 60, : 18-60, 60, 对流感合并症的高危人群对流感
22、合并症的高危人群, , 遗传过敏者和对鸡胚过敏者遗传过敏者和对鸡胚过敏者 主要目标主要目标: : 比现有的鸡胚同类疫苗的免疫原比现有的鸡胚同类疫苗的免疫原性和安全性相当性和安全性相当. .37MDCK细胞疫苗 临床研究14 随机双盲研究 38MDCK细胞疫苗 临床研究 局部和系统的抗原反应性与鸡胚疫苗相当局部和系统的抗原反应性与鸡胚疫苗相当 副反应较小和小于注射的活疫苗副反应较小和小于注射的活疫苗 未发现意外的安全性问题未发现意外的安全性问题 免疫原性不降低免疫原性不降低 MDCKMDCK细胞疫苗的免疫原性和安全性与鸡胚疫苗相当细胞疫苗的免疫原性和安全性与鸡胚疫苗相当38MDCK细胞疫苗 临床
23、研究局部和系统的抗原反应性与鸡胚39参加者 Iris de Bruijn, Ph.D.Iris de Bruijn, Ph.D. Global Clinical Director, Global Clinical Director, Influenza VaccinesInfluenza Vaccines Ed Geuns, Pharm.D.Ed Geuns, Pharm.D. Director, Regulatory AffairsDirector, Regulatory Affairs Michael Hare, B.S.Michael Hare, B.S. Manager, Regula
24、tory AffairsManager, Regulatory Affairs Alex Kersten, D.V.M.Alex Kersten, D.V.M. Senior Scientist,Senior Scientist,Pre-Clinical DevelopmentPre-Clinical Development Jeroen Medema, MSc.Jeroen Medema, MSc. Senior Scientist, VaccinesSenior Scientist, Vaccines Peter Finn, MRCVS., Peter Finn, MRCVS., FRCP
25、ath.FRCPath. ConsultantConsultant Michael Williams, B.S.Michael Williams, B.S. Vice President, Viral ProductsVice President, Viral ProductsThe Biologics Consulting GroupThe Biologics Consulting Group Ruth Wolff, Ph.D.Ruth Wolff, Ph.D. Director, TherapeuticsDirector, TherapeuticsThe Biologics Consult
26、ing GroupThe Biologics Consulting Group39参加者Iris de Bruijn, Ph.D.JeroMDCK as a substrate for MDCK as a substrate for influenza vaccine productioninfluenza vaccine productionSolvay PharmaceuticalsSolvay PharmaceuticalsPresentation to VRBPACPresentation to VRBPACNovember 16, 2005November 16, 2005MDCK as a substrate for influe
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