18 黄曲霉毒素B1检测细则.pdf
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1、 福建森宝食品集团股份有限公司企业标准 Q/JCWI 02182013 饲料中黄曲霉毒素饲料中黄曲霉毒素 B1B1 残留检测残留检测 酶联免疫吸附法酶联免疫吸附法 2013 - 08 - 01 发布 2013 - 08 - 01 实施 福建森宝食品集团股份有限公司 发 布 Q/JCWI 02182013 I 前 言 本标准按照GB/T 1.1标准化工作导则 第1部分:标准的结构和编写给出的规则起草 本标准由公司检测中心提出并审核 本标准起草单位:检测中心 本标准起草人:张超红 本标准批准人:黄金兰 本标准于2013年8月1日首次发布。 Q/JCWI 02182013 II 修改履历表修改履历表
2、 版本版本 章节章节 条款条款 修改内容或记录号修改内容或记录号 修改人修改人 (起草人)(起草人) 批准人批准人 修改日期修改日期 (发布日期)(发布日期) 实施日期实施日期 A/0 全新发布 张超红 黄金兰 2013.8.1 2013.8.1 Q/JCWI 02182013 1 饲料饲料中中黄曲霉毒素黄曲霉毒素 B1B1 残留检残留检酶联免疫吸附法酶联免疫吸附法 1 范围 本标准规定了饲料中黄曲霉毒素B1残留量,酶联免疫检测方法的制样和检测方法。 本标准适用于饲料中黄曲霉毒素B1残留量的测定。 2 试验原理 本试剂盒采用间接竞争ELISA方法,在酶标板微孔条上预包被偶联抗原,样本中残留的黄
3、曲霉毒素和酶标板微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗黄曲霉毒素的抗体,加入酶标二抗后,用TMB底物显色,样本吸光度值与其所含残留物黄曲霉毒素B1的含量成负相关, 与标准曲线比较, 再乘以其对应的稀释倍数即可得出样本中黄曲霉毒素B1残留量。 3 交叉反应率 黄曲霉毒素 B1100% 黄曲霉毒素B294% 黄曲霉毒素G177% 黄曲霉毒素G233% 4 设备及试剂 以下所用材料,除特别注明者外,均为分析纯;水为符合以下所用材料,除特别注明者外,均为分析纯;水为符合GB/T 6682GB/T 6682规定的二级水。规定的二级水。 4.1 设备 微孔板酶标仪450/630nm 振荡器 涡旋仪 天平:感量0.
4、01g 刻度移液管:10ml 洗耳球 聚苯乙烯离心管:50ml、2ml 微量移液器:单道 20200l、1001000l 多道250l 4.2 试剂 甲醇(分析纯) 氯化钠(分析纯) 去离子水 Q/JCWI 02182013 2 5 试剂盒提供的材料与试剂 5.1 96 孔酶标板 1 块 (包被有偶联抗原) 5.2 标准品 6 瓶:(1ml/瓶) 0ppb, 0.3ppb, 0.6ppb,1.2ppb,3.6ppb, 10.8ppb 5.3 酶标二抗 7ml 5.4 抗体工作液 10ml 5.5 底物液 A 液 7ml 5.6 底物液 B 液 7ml 5.7 终 止 液 7ml 5.8 20
5、浓缩洗涤液 40ml 6 溶液的配制 6.1 配液 1: 70%甲醇溶液 用去离子水将甲醇(分析纯)按7:3体积比进行稀释 (7份甲醇+3份去离子水) 用于样本前处理。 6.2 配液 2: 洗涤工作液 用去离子水将20浓缩洗涤液按1:19体积比进行稀释(1份20浓缩洗涤液+19份去离子水)用于酶标板的洗涤,洗涤工作液在4(39.2)环境可保存一个月。 7 样本前处理步骤 7.1 处理任何样本时,都必须注意: 处理任何样本时,都必须注意: a) 实验中必须使用一次性吸头,在吸取不同的试剂时要更换吸头。 b) 实验之前须检查各种实验器具是否洁净,必须使用洁净实验器具,以避免污染干扰实验结果。 c)
6、 移取离心后的上清液时,需将离心管稍微倾斜移取,避免取到杂质。 饲料(原料、配合料和饲料(原料、配合料和浓缩料)样本前处理方法浓缩料)样本前处理方法 称取2.0 0.05g饲料样本于50ml聚苯乙烯离心管中,加入0.5g 氯化钠,再加入10ml 70%甲醇(见配液1),用振荡器强烈振荡5min,在3000g以上,室温(20-25/68-77)离心5min; 移取500l上清液加入500l去离子水,用振荡器振荡混匀; 取20l用于分析。 8 检测步骤 8.1 测定前应须知: Q/JCWI 02182013 3 8.1.1 使用之前将模具内所有试剂与酶标板放实验桌回温至室温(20-25/68 -7
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