技术服务手册 .pdf
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1、 真菌学国家重点实验室 遗传操作和蛋白表达平台 大片段 基因 编辑组装以及生物 合成 技术服务手册 1. 技术简介 现有 的克隆技术使用的 载体在细胞中的稳定性还不够理想 ; 载体中含有包括抗药性基因在内的大肠杆菌质粒序列,不符合生物安全要求 。 在构建载体时由于依赖限制性核酸内切酶,步骤比较繁琐。 酿酒酵母存在高效的同源重组机制,两个 DNA 分子 间 只要有3050bp 长的同源区段就可以准确、有效地进行同源重组 。 利用酵母 质粒重组 系统 , 营养缺陷型( A/T/U) 抗性筛 选 标签 ,以及 真核 细胞 表达技术, 可用于 3050kb 大 片段的体外重组 以及 真核 细胞的合成
2、表达, 技术 稳定 且 重组 效率高 。 2. 应用范围 适用于 50kb 以下大片段基因簇的克隆以及在原核、真核细胞的表达。可应用于化合物的合成 基因簇的组装 , 进而在异源体系(酵母或 模式高等真菌 )中表达沉默 次级代谢产物 。并进行 药物 开发 研究 、功能材料应用等领域。 3. 表达体系 组装完成的合成大基因簇可在成熟的丝状真菌( Aspergillus nidulans)表达系统进行表达分析。另外, 本平台 也提供其它丝状真菌表达系统的转化和表达操作,详见下表。 原核表达 大肠杆菌 Escherichia coli BL21 真核表达 毕赤酵母 Pichia 丝状真菌模式种 构巢曲
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