高效液相色谱法同时测定植物油中3种维生素A和9种维生素E.pdf
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1、150摘要:建立1种通过高效液相色谱法同时测定植物油中3种维生素A(维生素A-全反式酯、维生素A-醋酸酯、维生素A-棕榈酸酯)和9 种维生素E(-生育三稀酚、-生育三稀酚、-生育三稀酚、-生育三稀酚、-生育酚、-生育酚、-生育酚、-生育酚、d-醋酸酯)的方法,并对13种植物油进行检测。结果表明:方法的色谱柱为CAPCELLPAKPFP(150mm4.6mm,5m)、提取剂为乙醇、2,6-二叔丁基对甲酚(BHT)添加量为0.0 1g、流动相为乙醇-水,梯度洗脱。建立的方法在质量浓度0.5 2 0 g/mL范围内,线性关系良好(R0.999),方法的检出限为0.10 0 2.8 0 mg/kg、定
2、量限为0.332 13.32 mg/kg、相对标准偏差(RSD)5.27%、回收率为8 0.6 7%9 8.42%。建立的方法可用于植物油中3种维生素A和9 种维生素E的同时检测。关键词:植物油;维生素A;维生素E;高效液相色谱Simultaneous determination of 3 kinds of vitamin A and 9 kinds ofvitamin E in vegetable oil by high performance liquid chromatography(1.School of Food Science and Engineering,Shaanxi Uni
3、versity of Science&Technology,2.Shaanxi Institute of Supervision&Testing on Product Quality,Xi an 710048,Shaanxi,China)Abstract:A method was established for simultaneous determination of 3 kinds of vitamin A(vitamin A-all-trans ester、v i t a m i n A-a c e t a t e、v i t a m i n A-p a l m i t a t e)a
4、n d 9 k i n d s o f v i t a m i n E(-T o c o t r i e n o l、-Tocot-rienol、-T o c o t r i e n o l、-Tocotrienol、-T o c o p h e r o l、-Tocopherol、-T o c o p h e r o l、-Tocopherol、d-To-copherol acetate)in vegetable oil by high performance liquid chromatography,and 13 kinds of vegetableoil were detected.T
5、he results showed that the chromatographic column was CAPCELL PAK PFP(150mm 4.6 mm,5 m),ethanol was used as the extractant,0.01 g 2,6-di-tert-butyl-p-cresol(BHT)was added,and the mobile phase was ethanol-water with gradient elution.The method had a good linearrelationship in the mass concentration r
6、ange of 0.5-20 g/mL(R 0.999).The detection limit was0.100-2.80 mg/kg,and the limit of quantitation was 0.332-13.32 mg/kg.The relative standard de-viation was not more than 5.27%,and the recovery rate was 80.67%-98.42%.The establishedmethod can be used for the simultaneous determination of 3 vitamin
7、A and 9 vitamin E in vegetable oil.Key words:vegetable oil;vitamin A;vitamin E;high performance liquid chromatography中图分类号:TS227文章编号:10 0 8-9 57 8(2 0 2 3)0 9-0 150-0 6维生素A(VA)和维生素E(V E)是机体维持正等功能 3;VE又称生育酚,被认为是主要的抗氧化常代谢所必需的脂溶性维生素 1-2 。VA 又称视黄剂之一,能够促进生育、延缓衰老、降低患癌风醇,具有促进机体生长、维持表皮完整和保护视力粮食与油脂高效液相色谱法同时测
8、定植物油中3种维生素A和9 种维生素E王璐,蒲华寅,邹力,范芳芳?(1.陕西科技大学食品科学与工程学院,陕西西安7 10 0 2 1;2.陕西省产品质量监督检验研究院,陕西西安7 10 0 48)WANG Lu,PU Hua-yin,ZOU Li,FAN Fang-fangXian 710021,Shaanxi,China;文献标志码:A2023年第36 卷第9 期险 4-7 。植物油中含有丰富的VE,且近年来不少油收稿日期:2 0 2 3-0 6-2 2基金项目:陕西省市场监督管理局科技计划项目(2 0 2 1KY05)作者简介:王璐(19 9 9 一),女,硕士,研究方向为食品检测。通信作
9、者:邹力(19 8 9 一),女,硕士,高级工程师,研究方向为食品安全质量检测。2023年第36 卷第9 期脂企业将VA作为营养强化剂加人食用植物油中 8-10 目前,测定VA和VE的方法主要有高效液相色谱法-12 、液相色谱-质谱法 13-14、气相色谱法 15、气相色谱-质谱法 16 。在GB5009.822016食品安全国家标准食品中维生素A、D、E的测定中,采用的高效液相色谱法也仅限于对1种VA(VA-全反式酯)和4种VE(-、-、-、-生育酚)进行测定,且该方法前处理时间长、步骤繁琐。彭雯等 17 研究了超高效合相色谱(UPC)技术快速测定植物油中的VA和VE,简化了前处理操作步骤,
10、但仅测定了VA、VE(-、-和-生育酚)含量且价格昂贵。郑熠斌等 18 建立了采用正相高效液相色谱法测定食物中8 种VE异构体及VA的方法,但样品需要经过皂化和液液萃取等过程,较为复杂且所测维生素种类较少。本方法利用配有紫外检测器的高效液相色谱仪进行分析,并对色谱条件和样品前处理过程进行优化,建立1种能够同时测定植物油中9 种VE和3种VA含量的方法,以期为植物油的品质评价、膳食营养指导提供技术支撑。1仪器与试剂1.1 材料与试剂植物油,市售;2,6-二叔丁基对甲酚(BHT),国药集团化学试剂有限公司;无水乙醇,分析纯;甲醇、乙腈、乙酸乙酯、丙酮、正已烷、异丙醇,色谱纯;VA-全反式酯(纯度9
11、 9.3%)、VA-醋酸酯(纯度99.8%)、V A-棕榈酸酯(纯度9 6.6%)、-生育酚(纯度9 8.8%)、-生育酚(纯度9 8.0%)、-生育酚(纯度9 7.4%)、8-生育酚(纯度9 2%)、-生育三烯酚(纯度9 8.7%)、-生育三烯酚(纯度98.1%)、-生育三烯酚(纯度9 8.9%)、-生育三烯酚(纯度9 9.3%)、d-醋酸酯(纯度99.9%),天津阿尔塔科技有限公司。1.2仪器与设备LC-30AD超高效液相色谱仪(配紫外检测器)、Inertsil 0DS-3色谱柱(2 50 mm4.6 mm,5 m),日本岛津公司CAPCELLPAKPFP色谱柱(150 mm4.6mm,5
12、m),三耀精细化工品销售(北京)有限公司;Cis-PAH色谱柱(150 mm4.6 mm,5 m),沃特世科技(上海)有限公司;BAS224S电子分析天平,塞多利斯科学仪器北京公司;KQ-500E超声波清洗器,昆山市超声仪器有限公司;XK80-A快速混匀器,江苏新康医疗器械有限公司。粮食与油脂1.3试验方法1.3.1标准溶液配制混合标准储备液配制:分别称取10 mg3种VA和9 种VE标准品,用无水乙醇溶解并定容至10mL,配制成质量浓度为1.0 0 mg/mL的混合标准储备液,转移至棕色瓶中,置于-18 冰箱中冷冻避光保存。混合标准溶液中间液:准确吸取混合标准储备液2 mL于10 mL容量瓶
13、中,用甲醇定容,配制成质量浓度为2 0 0 g/mL的混合标准溶液中间液,转移至棕色瓶中,置于-18 冰箱中冷冻避光保存。标准工作液的配制:分别移取适量混合标准溶液中间液,用甲醇稀释成质量浓度分别为0.5、1、5、10、2 0 g/mL的标准工作液,现配现用。1.3.2植物油样品前处理准确称取充分混匀的油样5.0 0 g,加人一定体积的提取剂和一定质量的抗氧化剂,涡旋30 s,在一定条件下超声后过0.2 2 um有机滤膜,上机分析。1.3.3单因素试验在提取剂为乙醇、超声时间2 0 min、提取剂用量10mL、BH T 添加量0.0 1%的基础条件下进行单因素试验,研究溶剂种类、超声时间、提取
14、剂用量和BHT添加量对植物油中VA+VE总含量的影响。1.3.4正交试验根据单因素试验结果,以提取剂种类、超声时间、提取剂用量、BHT添加量为因素,以VA+VE总含量为指标设计四因素三水平正交试验,因素水平见表1。表1正交试验因素水平表因素水平A提取剂种类1乙醇2丙酮3正已烧1.3.55高效液相色谱条件色谱柱为 CAPCELL PAKPFP(150 m m 4.6 mm,5 m);流速0.8 mL/min;柱温2 0;流动相为水+甲醇;进样量2 0 L;紫外检测器波长325 nm(VA)、2 9 4 n m(VE);洗脱时间42 min。1.4维生素含量计算X=PxVm151B超声C 提取剂时
15、间/min用量/mL102015252030D BHT添加量/0.010.050.10(1)152式中:X为样品中维生素的含量,mg/kg;m为样品质量,g;V为样品定容体积,mL;p为样品液中维生素的质量浓度,g/mL。2结果与讨论2.1色谱条件的优化2.1.1色谱柱的确定在设定的洗脱条件下,比较CAPCELLPAKPFP、C i s-PA H、I n e r t s i l O D S-33种色谱柱对维生素标准品的分离效果。结果表明:Ci-PAH和InertsilODS-3不能有效分离12 种维生素,而CAPCELLPAKPFP色谱柱具有疏水保留作用和立体选择性,能分离一些结构相似、用烷基
16、固定相很难分离的位置异构体,所有目标峰均可得到较好分离。因此本方法色谱柱选择CAPCELLPAKPFP。2.1.2流动相的确定试验采用甲醇-水、甲醇-乙腈、乙腈-水作为流动相进行比较。结果表明:在以甲醇-乙腈、乙腈-水为流动相时,-和-生育酚的色谱峰重叠难分离,而甲醇-水作为流动相时,分离效果较好。因此,本方法选择甲醇-水作为流动相。在流动相体积比的选择中,当甲醇与水的体积比为8 0:2 0 时,色谱图基线可以分离,但整体出峰时间过长,VA与VE的出峰间距也过长。当甲醇与水的体积比为9 0:10 时,检测时间缩短了,但是VE异构体基线不能完全分离。因此,本方法选择梯度洗脱程序,最终确定按表2
17、进行梯度洗脱分离效果最佳。表2 洗脱梯度表时间/min水/%017171528152924024117注:表中水与甲醇的数据均为体积分数。2.2样品前处理优化2.2.1不同提取剂对VA+VE总含量的影响由图1可知:乙醇和丙酮作为提取剂,VA+VE总含量明显多于其他提取剂。经色谱图分析,乙醇作为提取剂的色谱峰的峰型更好,且峰与峰之间的基线分离更好;甲醇、正已烷和异丙醇对个别目标物提取效果相对较差,而乙酸乙酯和乙不能有效分离目标物。因此,本方法选择乙醇作为提取剂。粮食与油脂450400F350F300F250F200F150F100500甲醇乙醇乙腈丙酮乙酸乙酯正己烷异丙醇提取剂种类图1不同提取剂
18、对VA+VE总含量的影响2.2.2超声时间对VA+VE总含量的影响由图2 可知:随着超声时间的延长,VA+VE总含量逐渐减少。这是因为VA和VE不稳定,超声时间过长可能会使维生素的结构发生改变而损失。因此,确定最佳超声时间为10 min。225斤22021521020520019519018518017517010图2 超声时间对VA+VE总含量的影响2.2.3提取剂用量对VA+VE总含量的影响由图3可知:随着提取剂用量的增加,VA+VE总含量先增加后减少,在提取剂用量为2 5mL时,VA+VE总含量最多。这可能是因为样品中含有的甲醇/%流速/(mL/min)830.8850.8850.898
19、0.8980.8830.82023年第36 卷第9 期L1520超声时间/min维生素含量是固定的,过量的提取剂并不能将样品中的维生素完全提取出,且还会造成试剂的浪费;而加人溶剂的体积越大,稀释的倍数越大,反而使VA+VE总含量减少。因此,确定最佳提取剂用量为 2 5 mL。400(3/B)/号A+VA350300250200150100500L5图3扶提取剂用量对VA+VE总含量的影响251015提取剂用量/mL302025353040352023年第36 卷第9 期2.2.4BHT添加量对VA+VE总含量的影响由图4可知:当BHT添加量为0.0 1g时,提取出的VA+VE总含量最多,而继续
20、添加BHT,VA+VE总含量反而减少。因此,确定最佳BHT添加量为 0.0 1 g。450400(3/)/UAA+V350300250200150100500.01图4BHT添加量对VA+VE总含量的影响2.2.5正交试验表3正交试验结果试验号A112131425262738393Ki1 101.971 374.571 036.371046.75K21 040.89927.121 055.42K923.98765.17 975.061033.51R177.99609.4080.36含量/-生育-生育生育-生育-生育酚-生育酚-生育酚-生育酚(mg/kg)三稀酚三稀酚 三稀酚三稀酚1253.21
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