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1、第39卷第5期2023年10月山西大同大学学报(自然科学版)Journal of Shanxi Datong University(Natural Science Edition)Vol.39 No.5Oct.2023蜂蜜中百里香酚含量的检测谢思瑶1,刘仁清2,蒋小良1,李天宝3,周伟光3(1.江门海关 技术中心,广东 江门 529000;2.佛山海关 综合技术中心,广东 佛山 528500;3.阳江海关 综合技术服务中心,广东 阳江 529500)摘要:建立了蜂蜜中百里香酚的气相色谱质谱联用检测方法。以正己烷作为提取剂,经超声,离心,上清液过滤、洗脱、氮气吹至近干,正己烷复溶,VF-1701
2、ms色谱柱(15 m 250 m 0.25 m)分离,质谱MRM模式下离子源温度280,电子能量70 eV进行检测,外标法定量。结果表明,百里香酚在0.5 50 mg/L的范围内线性良好,相关系数为0.999 1。加标回收率为88.67%91.03%之间,方法检出限为2.5 mg/kg。关键词:蜂蜜;百里香酚;气相色谱质谱联用中图分类号:O6-339文献标识码:Adoi:10.3969/j.issn.1674-0874.2023.05.002百里香酚为无色结晶粉末,具有抗菌、抗氧化、防蛀等特性,天然存在于唇形科植物百里香草、牛至草、麝香草等中,主要用于制香料、药物、指示剂、防腐剂1-3。在养蜂
3、领域,使用农药造成的药物残留及蜂螨耐药性问题逐渐显现,植物源性抗螨产物因易于获得、毒性小,逐渐被关注和研究,张静、梁伟博、吴子毅等都对百里香酚杀灭蜂螨进行了研究,并收到了良好的效果4-11。2013年欧盟批准将百里香酚作为植物保护产品投放市场;2016年加拿大批准登记百里香酚作为防控蜂巢瓦螨销售和使用;2020年欧盟批准柠檬酸、山梨酸、百里香酚和香草醛制备物作为饲料添加剂;2022年美国豁免百里香酚的残留限量。随着百里香酚的使用范围扩大和使用量增加,我们应关注其带来的负面影响,提前进行监测和研究检测方法,保证蜂蜜产量和质量,促进蜂蜜产业健康发展。1 实验部分1.1 仪器与试剂安捷伦三重四级杆气
4、相色谱质谱联用仪(安捷伦科技有限公司;Agilent 8890),分析天平(德国赛多利斯科学仪器(北京)有限公司;TE214S),超声波清洗机(上海声彦超声波仪器有限公司;SCQ-5201B),高速离心机(德国西格玛公司;Sigma 3K15),固相萃取柱(天津博纳艾杰尔科技有限公司;Agela cleanertPEP),全自动氮吹仪(上海屹尧仪器科技发展有限公司;N1),有机相针式滤膜(尚腾科技(广州)有限公司;0.22 m)。百里香酚标准物质(北京曼哈格科技有限公司;纯度98%),正己烷(上海麦克林生化科技有限公司;色谱纯),水(自制;一级)。2 实验方法2.1 试样的制备及保存无结晶的样
5、品,搅拌均匀即可;有结晶的样品,在密闭条件下,于60 以下的水浴中振荡,待样品全部融化后搅拌均匀,并迅速冷却至室温。以500 g作为试样,制备好的试样置于干净的样品瓶中,做好标记,于干燥阴凉的环境中密封保存。2.2 标准溶液的配制以正己烷为溶剂配制标准储备溶液,浓度为1g/L,于4储存,配制标准工作溶液时将标准储备溶液进行逐级稀释,稀释后浓度分别为2.5、5.0、10.0、20.0、50.0 g/L,用于绘制标准工作曲线。2.3 样品前处理称取2.000 g试样,置于50 mL带盖离心管内,加入10 mL水,2勺复合盐,于超声波清洗机中超声提取5 min,再加10 mL正己烷,继续超声提取10
6、 min,收稿日期:2023-07-03作者简介:谢思瑶(1983-),女,浙江余姚人,学士,工程师,研究方向:理化检测,通信作者。E-mail:文章编号:1674-0874(2023)05-0007-03山西大同大学学报(自然科学版)2023年再以8 000 r/min的速率离心5 min,取上清液过PEP柱,收集洗脱液,40 氮气吹至近干,用正己烷定容至1 mL,摇匀。定容液过0.22 m滤膜后收集于样品瓶中待测。2.4 色谱条件气相色谱条件:色谱柱为 VF-1701ms(15 m 250 m 0.25 m),进样口温度为250,载气为高纯氦气(99.999%),载气流量为1.7 mL/m
7、in,进样方式为不分流进样,进样量 1 L,升温程序为初始温度40,保持1 min,以40/min的速率升到120,再以 5/min的速率升到 240,再以 20/min的速率升到300,保持5 min。质谱条件为离子源温度280,电子能量70 eV,扫描方式为SCAN和MRM。3 结果与分析3.1 质谱分析条件的选择首先用 SCAN 方式对百里香酚标物进行扫描(m/z:50 500),得到的谱图通过谱库检索确定前级离子(m/z135)及保留时间为7.41 min,再进行产物离子扫描,依次设置碰撞能为10 eV,20 eV,30 eV,40 eV,通过比较不同碰撞能下产生的子离子强度确定对应的
8、子离子,然后进行MRM扫描,确定最佳碰撞能。前级离子TIC图与离子质谱图见图1-图5,具体分析参数详见表1。图1 百里香酚产物离子135的TIC图图2 百里香酚产物离子135在10 eV电子能轰击下产生的质谱图图3 百里香酚产物离子135在20 eV电子能轰击下产生的质谱图图4 百里香酚产物离子135在30 eV电子能轰击下产生的质谱图图5 百里香酚产物离子135在40 eV电子能轰击下产生的质谱图表1 离子对保留时间及质谱分析参数化合物名称百里香酚百里香酚前级离子135135产物离子115.191.1保留时间/min7.417.41碰撞能/eV20223.2 提取方式的选择称取 2.000
9、g 不含被测物的样品,加入 0.020 g标准物质作为待测物进行检测。通过比较采取涡旋、振荡、超声三种提取方式对蜂蜜中百里香酚提取效率的影响。由图 6 可知,在提取时间相同的情况下,超声提取的回收率最高,且采用超声提取效率最高。图6 不同提取方式的提取效率82023年3.3 线性范围及方法检出限通过绘制 m/z=91 离子的浓度与峰面积曲线图(图 7)可知,该曲线在 0.5 50 mg/L 的范围内线性良好,相关系数为 0.999 1。取 20 份蜂蜜样品,按上述 2.3 的方法处理后上机检测,以信噪比(S/N)=3 为检出限可知,百里香酚的检出限为2.5 mg/kg。图7 加标曲线3.4 回
10、收率与精密度向蜂蜜样品中添加百里香酚标准物质,按 2.3所述方法进行加标回收实验,方法的回收率与精密度如表 2 所示。可见百里香酚在不同的添加水平下,回收率在 88.67%91.03%之间,相对标准偏差6.01%。表2 回收实验加标量/(mgkg-1)3.010.030.0加标检测量/(mgkg-1)2.669.0027.31回收率/%88.6790.0091.03相对标准偏差RSD/%6.015.264.694 结论本实验所建立的蜂蜜中百里香酚含量的检测方法,使用正己烷作为提取溶剂,用PEP柱进行净化分离,检测时间短,操作简便,有机物使用量较少,方法检出限为 2.5 mg/kg,回收率为 8
11、8.67%91.03%,RSD6.01%,有较好的准确度与精密度,可为蜂蜜产业的发展提供检测技术参考。参考文献1 黄学者,贾光群,魏红跃,等.超高效液相色谱-紫外/荧光法检测蜂蜜中百里香酚含量 J.食品安全质量检测学报,2020,10(20):7220-7226.2 李美荣,张雪冰,宁新妍,等.百里香酚在我国植物领域的研究进展 J.世界农药,2022,44(6):15-20.3 仇昆伦,毛海舫,欧文华,等.百里香酚的研究进展 J.香料香精化妆品,2008,4(2):28-32.4 杨媚,刘霜莉,王玉洁,等.百里香酚的生理功能及其在畜禽生产中的应用 J.饲料研究,2020,43(10):131-
12、135.5 窦秀静,房春洋,黄甫迎旭,等.百里香酚的功能及其在动物生产中的应用 J.动物营养学报,2020,32(12):1-9.6 张静,冯岗,袁旭超,等.百里香酚抑菌活性初探 J.中国农学通,2009,25(21):277-280.7 梁伟博.植物源杀螨活性物质复配增效研究 D.陕西:西北农林科技大学,2011.8 吴子毅,范青海,苏秀霞.百里酚对刺足根螨的毒力实验 J.华东昆虫学报,2006,15(1):67-69.9 黄双修,黄智勇,周婷,等.蜜蜂瓦螨研究的最新发现及其对探索瓦螨防治新途径的启示 J.中国养蜂,2003,54(1):4-5.10 曾银欢.蜂蜜和蜂王浆中多种杀螨剂残留检测
13、方法研究 D.浙江:浙江工业大学,2015.11 李旭涛.我国植物源蜂螨控制剂的研究与开发 J.蜜蜂杂志,2002(7):8-10.Determintion of Thymol Content in HoneyXIE Si-yao1,LIU Ren-qing2,JIANG Xiao-liang1,LI Tian-bao3,ZHOU Wei-guang3(1.Jiangmen Customs Technical Center,Jiangmen Guangdong,529000;2.Foshan Customs Comprehensive Technology Center,Foshan Guan
14、gdong,528500;3.Yangjiang Customs Comprehensive Technical Service Center,Yangjiang Guangdong,529500)Abstract:The gas chromatography-mass spectrometry detection method for thymol in honey was established.Thymol in honey was detected with n-hexane as an extractant,after ultrasound,centrifugation,supern
15、atant filtration,elution and blowing to nearlydry with nitrogen,then was redissolved with n-hexane,separated by VF-1701ms chromatographic column(15 m250 m0.25m),detected at an ion source temperature of 280 and electron energy of 70 eV and quantified by external standard method.Theresults showed that thymol showed good linearity within the range of 0.5 50 mg/L,with a correlation coefficient of 0.9991.Therecovery was 88.67%91.03%,and the detection limit of this method was 2.5 mg/kg.Key words:honey;thymol;GC-MS责任编辑 李世杰谢思瑶等:蜂蜜中百里香酚含量的检测9