茯苓皮与白茯苓中三萜类成分的HPLC指纹图谱与化学模式识别研究.pdf
《茯苓皮与白茯苓中三萜类成分的HPLC指纹图谱与化学模式识别研究.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《茯苓皮与白茯苓中三萜类成分的HPLC指纹图谱与化学模式识别研究.pdf(11页珍藏版)》请在文库网上搜索。
1、天然产物研究与开发NatProdResDev2023,35:1469-1479茯苓皮与白茯苓中三枯类成分的HPLC指纹图谱与化学模式识别研究占慧慧1.2.3,丁婵1.2 3,彭思源1.2.3,刘媛1-2 3,孟俊华1.2.3,肖作为1*,崔培梧1.2.3*湖南中医药大学药学院;国家中医药管理局中药药性与药效三级科研实验室;3湖南中医药大学菌物药研究室,长沙410 2 0 8摘要:建立茯苓皮与白茯苓中三类成分的HPLC 指纹图谱,并对其进行化学模式识别研究,为菌物药茯苓的质量控制及标准制定提供依据。采用HPLC法,Agilent5TC-Cis(2)色谱柱(2 50 mm4.6mm,5m),以乙腈
2、-0.3%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL/min,柱温2 5,变波长方式检测,采集波长为2 42、2 0 3nm,进样量10 L。建立了茯苓皮与白茯苓中三类成分指纹图谱,应用聚类分析(CA)、主成分分析(PCA)手段结合相似度评价对实验数据进行识别,以分析不同茯苓样品的相似性和差异性,找出可反映茯苓皮与白茯苓三成分特征的关键色谱峰。茯苓皮与白茯苓三成分指纹图谱的共有模式下确认了6 个共有峰,分别为2 号峰(茯苓新酸B)、3号峰(去氢土莫酸)、4号峰(茯苓新酸A)9号峰(去氢茯苓酸)、10 号峰(茯苓酸)、12 号峰(松苓新酸);不同来源的茯苓样品相同药用部位间相似度均在0.90
3、以上;依据CA和PCA分析结果将茯苓样品药用部位分为两大类。PCA分析结果显示包括代表去氢土莫酸、去氢茯苓酸、茯苓酸成分在内的7 个共有色谱峰(3、5和6、8 11号峰)在评价茯苓皮及白茯苓质量时必不可少,其余包括代表茯苓新酸B、茯苓新酸A、松苓新酸成分在内的8 个色谱峰(1和2、4、7、12 15号峰)可作为评价茯苓皮质量的特征鉴别峰;白茯苓中15个共有色谱峰间的差异比茯苓皮小。本研究建立的茯苓三HPLC指纹图谱和化学模式识别可为不同茯苓药材质量控制与评价提供参考。关键词:茯苓;三;指纹图谱;聚类分析;主成分分析;质量控制中图分类号:R284.1D0I:10.16333/j.1001-688
4、0.2023.9.001Study on HPLC fingerprint and chemical pattern recognitionof triterpenoids in Poriae Cutis and White PoriaZHAN Hui-hil-23,DING Chan-2,PENG S-yuanLIU Yuan23,MENG Jun-hual-2.3,XIAO Zuo-weil*,CUI Pei-wuCollege of Pharmacy,Hunan University of Chinese Medicine;2 Research Lab of TCM Property&E
5、fficacy,Tier 3,National Administration of TCM;3 Mycomedicine Research Lab,Hunan University of Chinese Medicine,Changsha 410208,ChinaAbstract:In this study,HPLC analysis combined with chemical pattern recognition was employed to establish the HPLC fin-gerprint related to triterpenoids in Poriae Cutis
6、 and White Poria,which can provide a reference for quality control and standardestablishment of decoction pieces derived from mycomedicine Poria cocos.HPLC method was adopted and performed on anAgilent 5 TC-Cis(2)column(250 mm 4.6 mm,5 m).The mobile phase was consisted of acetonitrile and 0.3%phos-p
7、horic acid solution,and gradient elution procedure was employed with the flow rate setting at 1.O mL/min.The column tem-perature was set at 25 C,the detection wavelength was set at 242 and 203 nm,and the injection volume was 10 L,respec-tively.To establish the HPLC fingerprint and chemical pattern r
8、ecognition of Poriae Cutis and White Poria,cluster analysis收稿日期:2 0 2 3-0 2-2 0基金项目:国家自然科学基金(8 197 32 11/C0033375);湖南省中医药科研计划(D2022139(A 2 0 2 2 0 0 5-17);湖南省大学生创新创业训练计划(湘教通2 0 2 2 17 4号-2 918);湖南中医药大学“十四五”重点学科-生物工程学科(校行发规字2 0 2 3 2 号)*通信作者E-mail:,文献标识码:A接受日期:2 0 2 3-0 7-0 5文章编号:10 0 1-6 8 8 0(2 0 2
9、 3)9-146 9-11,1,2,31,1,2,3*1470(CA),principal component analysis(PCA)and similarity evaluation were adopted to process the experimental data,the sim-ilarity and difference of Poriae Cutis and White Poria samples were analyzed subsequently.Finally,the key chromatographicpeaks representing triterpenoi
10、ds were pointed out from the established HPLC fingerprint.Among the common chemical compo-nents showed in the chromatograms,six peaks related to poricoic acid B(peak 2),dehydrotumulosic acid(peak 3),poricoicacid A(peak 4),dehydropachymic acid(peak 9),pachymic acid(peak 10),and dehydrotrametenolic ac
11、id(peak 10)wereindentified,respectively.The similarity of tested decoction pieces from the same part of P.cocos sclerotium were all above O.90.According to CA and PCA data,all the decoction pieces analyzed in this study can be divided into two groups representingdifferent medicinal parts of P.cocos
12、sclerotium.Seven common chromatographic peaks including peak 3(dehydrotumulosicacid),peak 5,peak 6,peak 8,peak 9(dehydropachymic acid),peak 10(pachymic acid)and peak 11 were essential for thequality evaluation of Poriae Cutis and White Poria,the other eight chromatographic peaks including peak 1,pea
13、k 2(poricoicacid B),peak 4(poricoic acid A),peak 7,peak 12(dehydrotrametenolic acid)and peaks 13 to 15 could be used as thecharacteristic identification peaks for evaluating the quality of Poriae Cutis according to the loading scatter analysis of PCAdata.The characteristic difference deduced from th
14、e 15 common chromatographic peaks of White Poria samples was smallerthan that of Poriae Cutis samples.The established HPLC fingerprint of Poriae Cutis and White Poria combined with chemical patternrecognition can provide a scientific reference for the quality control and evaluation of samples or pro
15、ducts derived from P.cocos.Key words:Poria cocos;triterpenoids;fingerprint;cluster analysis;PCA;quality control茯苓又名茯、茯灵、松等,系多孔菌科真菌茯苓Poria cocos(Sc h w.)Wo l f 的干燥菌核,味甘、淡,性平,归心、肺、脾、肾经,有利水渗湿、健脾宁心的功效 。茯苓收载于中华人民共和国药典(简称中国药典)2 0 2 0 年版一部,是中药四君八珍之一,有“十方九苓 之称2 。茯苓的主要药效物质是茯苓多糖和茯苓三枯3,现代药理学研究表明,茯苓三具有利尿4、抗肿瘤5、
16、免疫调节6 、抗炎7 、抗衰老8 、降血糖和调血脂9 等作用,是当前用于表征茯苓质量和效应的重要指标10-2 。目前市场流通的茯苓主要为栽培品种,不同的产地、加工方式、饮片规格等都可能影响茯苓药材和饮片的质量1.1。2 0 2 0 年版中国药典仅采用薄层色谱法鉴别控制茯苓和茯苓皮药材的质量,难以全面反映其质量的优劣。指纹图谱研究是现代中药领域内普遍被认可、应用较广泛的中药质量控制方法之一,具有整体性高、特征性强等优势,符合中药多成分综合作用的特点,有进一步鉴别、鉴定和分类的潜力14,15。化学模式识别可对指纹图谱的多维信息进行分析,准确反映药材的质量差异,从而达到整体描述和合理评价药材质量的目
17、的13。本研拟究建立茯苓皮(源于茯苓菌核表皮)与白茯苓(源于茯苓菌核去皮后的部位)的HPLC指纹图谱,并结合模式识别手段分析各共有峰对指纹图谱的作用,找出其中的主要峰和特征峰,从整体上评价茯苓皮和白茯苓中各化学物质的差异,为茯苓药材的质量控制提供依据。天然产物研究与开发1仪器与试药1.1仪器Agilent1200高效液相色谱仪(美国安捷伦科技公司);JS-40型超声波清洗仪(常州鸿泽实验科技有限公司)。1.2试药对照品茯苓新酸B(批号140 7 2 3,质量分数98%)、茯苓新酸A(批号140 314,质量分数98%)、去氢茯苓酸(批号140 90 3,质量分数98%)、松苓新酸(批号140
18、90 2,质量分数98%)、茯苓酸(批号140 2 12,质量分数98%)购自成都克洛玛生物科技有限公司;去氢土莫酸(批号AF21032,质量分数98%)购自成都埃法生物科技有限公司;乙腈为色谱纯,水为怡宝纯净水,其余试剂为分析纯。茯苓药材样品来源见表1,经湖南中医药大学刘塔斯教授鉴定为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos(Sc h w.)Wo l f 的不同药用部位,符合中国药典2020年版各项规定。2方法与结果2.1色谱条件Agilent 5 TC-Cis(2)(2 50 m m 4.6 m m,5m)色谱柱;流动相为0.3%磷酸水溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱:0 18 min,50
19、%60%B;1828min,60%B;28 58 min,60%92%B;58 68 min,92%B;检测波长为2 42 nm和2 0 3nm;进样量10L;柱温2 5;体积流量1.0 mL/min。Vol.35Vol.35编号No.S1S2S3S4S5S6S7S8S9S10S11S12S13S14占慧慧等:茯苓皮与白茯苓中三枯类成分的HPLC指纹图谱与化学模式识别研究药用部位Medicinal part茯苓皮PoriaeCutis茯苓皮PoriaeCutis茯苓皮PoriaeCutis茯苓皮Poriae Cutis茯苓皮PoriaeCutis茯苓皮PoriaeCutis茯苓皮PoriaeC
20、utis茯苓皮PoriaeCutis茯苓皮PoriaeCutis白茯苓WhitePoria白茯苓WhitePoria白茯苓WhitePoria白茯苓WhitePoria白茯苓WhitePoria1471表1样品信息Table 1 Information of samples生产企业Manufacturer安徽三义堂中药饮片有限公司亳州市中药饮片厂云南鸿翔中药科技有限公司湖南振兴中药有限公司康美药业股份有限公司四川藏曦堂生物科技有限公司亳州市泽信堂药业有限公司河北纽恩堂电子商务有限公司湖南聚仁中药饮片有限公司湖南聚仁中药饮片有限公司康美药业股份有限公司亳州市泽信堂药业有限公司云南国鹤药业有限公司
21、岳阳天香中药饮片有限公司产地Origin云南安徽云南湖南湖南四川云南云南云南湖南湖南云南云南云南批号Lot No.2103009202110252021102321073109200801781202111092021110320211112210113012108310121031501120211031521070082021111072.2溶液的制备2.2.1混合对照品溶液的制备精密称取各茯苓三酸对照品适量,加甲醇溶解制成茯苓新酸B、去氢土莫酸、茯苓新酸A、去氢茯苓酸、茯苓酸、松苓新酸对照品质量浓度分别为0.020 7,0.071 4,0.006 4,0.038 6,0.037 1,0.
22、017 1 mg/mL的混合对照品溶液。放于4冰箱保存,备用。2.2.2供试品溶液的制备取茯苓样品粉末2.0 g(过6 0 目筛),精密称定,置10 0 mL干燥具塞锥形瓶中,加甲醇50 mL,密塞,称定质量,超声处理30 min,放冷,用甲醇补足减失质量,滤过,茯苓皮样品滤液经0.2 2 m微孔滤膜过滤,取续滤液,即得;白茯苓样品滤液先旋转蒸干后定容至2.0 mL,再经0.2 2 m微孔滤膜过滤,取续滤液,即得。2.3方法学考察2.3.1精密度实验取云南茯苓皮样品(S8),按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,依据“2.1”项下的色谱条件,连续进样测定6 次,以茯苓酸(10 号峰为参照峰,
23、计算得各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD值分别在0.0 4%0.8 6%和0.2 2%1.6 9%之间,表明仪器精密度良好。2.3.2稳定性实验取云南茯苓皮样品(S8),按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,依据“2.1”项下的色谱条件,分别于0、2、4、6、8、12、2 4h进样测定,测得各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积并计算得RSD值分别在0.0 1%0.2 7%和0.32%1.19%之间,表明供试品溶液在2 4h内稳定。2.3.3重复性实验取云南茯苓皮样品(S8)6 份,精密称定,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,依据“2.1”项下的色谱条件进样测定,测得各色谱峰的相对
24、保留时间和相对峰面积并计算得RSD值分别在0.0 2%0.29%和0.8 1%4.53%之间,表明方法重复性好。2.3.4溶剂峰和滞后峰的考察取空白对照(甲醇)和云南茯苓皮样品(S8)溶液,检测时间延长至2 h,考察结果如图1所示,测试结果表明空白溶剂无干扰且未见滞后峰出现。2.4#指纹图谱的建立2.4.1#指纹图谱共有模式的建立将14批不同产地不同药用部位茯苓样品的色谱图导人“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2 0 12 版)”软件分别生成茯苓样品的叠加图谱和对照指纹图谱。14批茯苓皮和白茯苓样品的叠加图谱和对照指纹图谱见图2,茯苓皮和白茯苓各自的对照指纹图谱及混合对照品HPLC色谱图见图3
25、。由图2 和3可知,茯苓皮与白茯苓样品共有的典型色谱峰有15个;经与混合对照品溶液色谱图比对,1472天然产物研究与开发AVol.35B0.00Fig.1 Investigation chromatograms of solvent peaks(A)and hysteresis peaks(B)0图2 14批茯苓皮与白茯苓饮片的指纹图谱叠加图和对照指纹图谱Fig.2 Superimposed fingerprints and control fingerprint of 14 batches of Poriae Cutis and White Poria decoction pieces20.
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 茯苓皮 茯苓 三萜类 成分 HPLC 指纹 图谱 化学 模式识别 研究