妇科艾灸器对寒湿凝滞型原发性痛经模型大鼠的治疗作用及其机理研究.pdf
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1、中国科技期刊数据库 医药 20 妇科艾灸器对寒湿凝滞型原发性痛经模型大鼠的治疗作用及其机理研究 杨一帆 鼎吉星生物科技有限公司,北京 102208 摘要:摘要:本研究旨在构建一种适用于寒湿凝滞型原发性痛经(PD)的大鼠模型,同时观察妇科艾灸器的疗效并探讨其治疗原理。本实验以 36 只雌性 SD 大鼠为研究对象,随机分为四组:空白对照组、疾病模型组、艾灸器治疗组及布洛芬治疗组,各组均有 9 只大鼠。我们采用低温及药物联合干预(雌二醇+肾上腺素+缩宫素)以构建寒湿凝滞型 PD 模型。通过扭体反应试验,我们观察妇科艾灸器对 PD 大鼠行为的影响。苏木精-伊红染色法(HE 染色)用于研究各组子宫组织的
2、病理变化,酶联免疫吸附测定(ELISA)用于检测血清和子宫组织中前列腺素 F2(PGF2)、前列腺素 E2(PGE2)、6-酮前列腺素 F1(6-keto-PGF1a)、血栓素 B2(TXB2)的水平。结果表明,与疾病模型组相比,艾灸器治疗组和布洛芬治疗组的扭体反应明显减少,延长了潜伏期,降低了扭体总分,差异具有统计学意义。HE 染色结果显示,艾灸器治疗组和布洛芬治疗组子宫组织的病理改变较小,血管较多,结构更紧密。同时,艾灸器治疗组与布洛芬治疗组比较,艾灸器治疗组的血管更多,结构更致密,炎性细胞浸润相对较少。布洛芬组和艾灸器治疗组的血清和组织中 PGF2 和 TXB2 水平明显降低,而 PGE
3、2 和 6-Keto-PGF1 水平明显升高。布洛芬组的 PGF2、PGE2 在血清和组织中的表达与艾灸器治疗组相比没有统计学差异,但布洛芬组的6-Keto-PGF1 和 TXB2 水平分别降低和升高。因此,我们得出结论:妇科艾灸器能有效减少寒湿凝滞型 PD 大鼠的扭体反应,改善子宫组织的病理状况,降低 PGF2 和 TXB2 水平,同时升高 PGE2 和 6-Keto-PGF1 水平,表明妇科艾灸器对于治疗寒湿凝滞型 PD 具有显著效果。关键词:关键词:原发性痛经;寒湿凝滞;艾灸;前列腺素 中图分类号:中图分类号:R24 原发性痛经,也称为月经痛,是指女性在经期或经期前后出现的周期性下腹疼痛
4、。据调查,大学生中的痛经发病率高达 50%,而且 29%的人疼痛难以忍受,这严重影响了他们的学习和生活1。研究认为前列腺素(prostaglandin,PG),特别是前列腺素 F2(PGF2),是原发性痛经发生的关键因素。目前,西医治疗痛经主要采用非甾体抗炎药,其机制主要是通过抑制下丘脑体温调节中枢的前列腺素合成酶,减少前列腺素 PGE1 的合成和释放,以达到止痛效果。然而,非甾体抗炎药的胃肠道副作用和疗效短暂的问题不容忽视,这种治疗方法更多地是对症而非对病根的治疗2,3。在中医学中,原发性痛经被归类为“经行腹痛”和“室女痛经”。临床上,根据不同的症状,原发性痛经被进一步分为寒湿凝滞、气滞血瘀
5、、湿热瘀阻、肝肾亏虚和气血虚弱五种类型。其中,寒湿凝滞型痛经是最常见的类型。因此,寒湿凝滞型痛经的治疗和预防已经成为临床上亟需解决的问题。艾灸作为一种中医传统治疗方式已被广泛应用于治疗寒湿凝滞型痛经。课题组以往研究表明,专病专治的妇科艾灸器能够通过温热作用促进能够局部组织血液循环和淋巴循环,且能敏化任脉上的会阴穴及曲骨穴达到治疗寒湿凝滞型原发性痛经的目的,而且疗效持久。但其具体机制依旧不明。因此,本研究通过采用冰水浸泡法结合苯甲酸雌二醇、肾上腺素和缩宫素注射法,建立寒湿凝滞型原发性痛经模型大鼠。探究妇科艾灸器干预前后痛经大鼠的扭体行为学反应、组织的病理形态改变以及血清及子宫组织中 PGF2、P
6、GE2、6-Keto-PGF1 及 TXB2表达水平的变化。以探讨妇科艾灸器对寒湿凝滞型原发性痛经模型大鼠止痛效应影响的差异性及其可能的作用机制。为临床治疗寒湿凝滞型原发性痛经提供理论依据及数据基础。1 实验材料 中国科技期刊数据库 医药 21 1.1 实验动物 采用清洁级别的未受孕的雌性 SD 大鼠,年龄在9-10 周,已经达到性成熟但尚未交配,来源于北京维通利华实验动物技术有限公司(许可证号:SCXK(京)2012-0001)。所有大鼠在恒温恒湿的环境中饲养,可以自由饮水和进食,并保持 12 小时的光照和 12 小时的黑暗的光周期。我们的实验伦理符合国际兽医学编辑协会发布的关于动物伦理与福
7、利的作者指南共识的要求。1.2 药品与试剂 大鼠用妇科艾灸器,参照专利号:CN213553691U,CN306191880S,CN211751015U(鼎吉星生物科技有限公司),依照成年女性身高比例折算,按 8:1 的比例利用3D打印制作大鼠专用妇科艾灸器以及手工制备艾灸柱。芬必得布洛芬缓释胶囊(中美天津史克制药有限公司生产,0.3g/粒,国药准字 H10900089),缩宫素注射液(杭州动物药品厂,兽药字(2013)110201571),苯甲酸雌二醇注射液(杭州动物药品厂,兽药字(2013)110202511),盐酸肾上腺素注射液(远大医药有限公司,国药准字号 H42021700),PGF2
8、 ELISA Kit(Elabscience,E-EL-H1841c),PGE2 ELISA Kit(Elabscience,E-EL-0034c),6-keto-PGF1a ELISA Kit(Elabscience,E-EL-0054c),TXB2 ELISA Kit(Elabscience,E-EL-R0965c)。2 实验方法 2.1 分组与造模 分组:大鼠随机分为空白对照组、模型组、妇科艾灸器组及布洛芬组,最终各组均为 9 只。模型构建方法:通过低温与药物(雌二醇+肾上腺素+缩宫素)的联合使用,我们构建了寒湿凝滞型原发性痛经的大鼠模型4。除空白对照组外,其他各组大鼠在连续 12 天内
9、接受雌二醇皮下注射,以同步化子宫,其中第一天和第 12 天为每只 0.8mg,第 2 天至第 11天为每只每天 0.4mg。从第 5 天开始,我们每天两次按照 0.3mg/kg/次的剂量进行肾上腺素皮下注射,连续 7天。首次注射后 2 小时,将大鼠浸入 5-8的水中,持续 5 分钟,直到大鼠无力攀爬并出现寒战为止。然后不擦干毛发,将大鼠放回饲养笼停食,2 小时后再次注射 0.3mg/kg 的肾上腺素。这样的操作是为了模拟寒湿凝滞的症状。在第 12 天,至少在最后一次处理后 30分钟,我们通过腹腔注射 2U/只的缩宫素,以复制大鼠的痛经模型。2.2 治疗方法 从造模第 5 天起,每天固定时间进行
10、治疗,1 次/天,连续 7 天。模型组:造模但不做任何处理。妇科艾灸器组:取穴:参照方宗畴等实验大鼠针灸俞穴图谱及针刺手法5对会阴穴与曲骨穴进行定 位;工 具:参 照 专 利 号:CN213553691U,CN306191880S,CN211751015U(鼎吉星生物科技有限公司),按 8:1 的比例利用 3D 打印制作大鼠专用妇科艾灸器以及手工制备艾灸柱;施灸:将灸器适配的艾柱点燃,插入艾灸盒孔内,置于艾灸会阴穴以及曲骨穴中点的阴道口处,每次约 15 分钟。布洛芬组:芬必得布洛芬缓释胶囊,依照剂量按50 kg 成人体表面积折算,每只大鼠灌胃 0.12 mg/g/天。2.3 指标观察 2.3.
11、1 扭体反应观察 在腹腔注射缩宫素 30 分钟内,观察各组大鼠的扭体反应,记录大鼠扭体次数以及首次扭体的潜伏期,计算扭体抑制率。扭体反应标准如下:大鼠腹部收缩内凹,躯干与后肢伸展,臀部以及一侧肢体内旋。扭体抑制率的计算公式为:(模型组平均扭体次数-治疗组平均扭体次数)/模型组平均扭体次数100%。2.3.2 HE 染色观察大鼠子宫组织病理形态 取出子宫后用 10%福尔马林固定,石蜡包埋,HE染色进行组织学观察。主要观察子宫组织血管分布及炎性细胞浸润情况。2.3.3 ELISA 法检测血清及子宫组织 PGF2、PGE2、6-Keto-PGF1 及 TXB2 表达水平 从大鼠腹主动脉中取 2 至
12、4 毫升的血液,然后在室温下静置 1 小时,再在 4下以 2500 转每分钟的速度离心 15 分钟,取出血清并在-80下保存。接下来,我们分离大鼠子宫组织并用生理盐水进行冲洗,测量子宫的质量,然后用质量的九倍的生理盐水制备 10%的组织匀浆。之后在 4下以 2500 转每分钟的速度离心 15 分钟,取上清液并在-80下保存。根据 ELISA试剂盒的使用说明,检测各组大鼠血清和子宫组织中中国科技期刊数据库 医药 22 的 PGF2、PGE2、6-Keto-PGF1及 TXB2 的含量。2.4 统计学方法 实验过程中,模型组内有一只大鼠死亡,统计数据满足统计学要求。数据以(x s)表示,各组数据比
13、较采用单因素方差分析检验,组间比较采用 LSD 法,以 P0.05 为差异有统计学意义。以上统计学分析由 SPSS 26 软件完成。3 实验结果 3.1 扭体反应观察 在空白对照组中,我们并未观察到扭体反应。相比之下,模型组大鼠的扭体潜伏期明显短,扭体次数多,这种差异具有统计学意义(P0.01),这说明我们成功地构建了模型。当我们将妇科艾灸器组和布洛芬组与模型组进行比较时,发现前两者的体潜伏期明显延长,差异具有统计学意义(P0.01);与模型组比较,妇科艾灸器组和布洛芬组 30 分钟内扭体次数减少,扭体抑制率上升,差异有统计学意义 P0.01);布洛芬组与妇科艾灸器组相比较,扭体潜伏期略有延长
14、,差异有统计学意义(P0.05);布洛芬组与妇科艾灸器组相比较,30 分钟内扭体次数减少,差异有统计学意义(P0.05);三组实验相比较,说明妇科艾灸器组与布洛芬组均能延缓痛经出现的时间,镇痛效果佳。见表 1 表 1 各组 PD 大鼠扭体反应的行为学观察结果(s)组别 只数 潜伏期(分钟)扭体次数(30分钟内)扭体抑制率(%)空白对照组 9-模型组 8 3.551.05 34.507.63-妇科艾灸器组 9 9.171.36a 13.753.18a 60.14 布洛芬组 9 12.381.98ac 10.503.68ac 69.57 与模型组相比,ap0.01;与妇科艾灸器组相比,bp0.01
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