氟尿嘧啶联合低剂量雷公藤内酯对胃癌细胞增殖和迁移及侵袭的影响及机制研究.pdf
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1、论著【引用本文】杜艳明崔丽伟檀靖宇等.氟尿嘧啶联合低剂量雷公藤内酯对胃癌细胞增殖和迁移及侵袭的影响及机制研究.中国医药():.:./.氟尿嘧啶联合低剂量雷公藤内酯对胃癌细胞增殖和迁移及侵袭的影响及机制研究杜艳明 崔丽伟 檀靖宇 马召雨 马丽丽河北省唐山市人民医院消化科唐山 通信作者:马丽丽:.【摘要】目的 探讨氟尿嘧啶联合雷公藤内酯是否可协同抑制胃癌细胞增殖和迁移及侵袭并进一步分析可能的作用机制 方法 将体外培养的胃癌 细胞依据添加药物的不同分为对照组(不加药处理)、氟尿嘧啶组(加 /的氟尿嘧啶)、雷公藤内酯组(加 /的雷公藤内酯)、联合组(加/的氟尿嘧啶和 /的雷公藤内酯)观察噻唑蓝实验检测
2、氟尿嘧啶(、和 /)、雷公藤内酯(、和 /)对胃癌 细胞增殖的抑制作用并计算细胞生存率和联合作用指数 采用细胞划痕实验、实验、凋亡实验和蛋白质印迹法分别检测氟尿嘧啶、雷公藤内酯单独或联合对 细胞迁移率、细胞侵袭率、细胞凋亡率、磷酸酶 的癌性抑制因子()、蛋白磷酸酶()、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶标复合物()、哺乳动物雷帕霉素靶标复合物()蛋白表达的影响 结果 氟尿嘧啶和雷公藤内酯均呈剂量依赖性抑制 细胞增殖半数抑制浓度分别为 /、/二者不同浓度联用联合作用指数值均小于 联合组细胞迁移率、细胞侵袭率低于氟尿嘧啶组和雷公藤内酯组()比()、()()比()、()差异均有统计学意义(均 )联合组细胞凋亡
3、率高于氟尿嘧啶组和雷公藤内酯组(均 )联合组细胞、蛋白相对表达水平低于对照组、氟尿嘧啶组和雷公藤内酯组差异均有统计学意义(均 )结论氟尿嘧啶联合雷公藤内酯可协同抑制 细胞增殖、迁移和侵袭可能与抑制/信号通路传导有关【关键词】胃癌 氟尿嘧啶 雷公藤内酯 增殖 迁移 侵袭【基金项目】河北省医学科学研究课题计划()【】./.【中图分类号】.【文献标识码】:.【】.()(/)(/)(/).(/)(/).()()()()./.()()()()()()().中国医药 年 月第 卷第 期 .().()./.【】【】()胃癌是引起癌症相关死亡的常见原因在中国胃癌的发病率和患病率均呈不同程度的增长趋势 铂类和蒽
4、环类化合物为广泛应用多年的抗癌药物表柔比星、顺铂和氟尿嘧啶的联合用药是目前胃癌的标准化疗方案之一 然而化疗药物的耐药性及严重的不良反应限制了其临床应用其中氟尿嘧啶的耐药较为常见 雷公藤内酯是一种二萜三环氧化物已被发现具有有效的免疫抑制和抗炎特性 研究显示雷公藤内酯在体外可抑制多种类型癌细胞的增殖并抑制体内肿瘤的生长和转移 体内研究结果表明雷公藤内酯可明显降低裸鼠乳腺癌肿块的质量和体积 雷公藤内酯不仅可以在体外和体内直接抑制肿瘤生长而且还可以作为辅助剂有效增强化疗或其他细胞毒性药物的抗肿瘤作用据报道雷公藤内酯和其他抗癌药物联用对肿瘤细胞生长的抑制作用优于这些药物单独使用本研究经河北省唐山市人民医
5、院伦理委员会批准()旨在探讨氟尿嘧啶联合雷公藤内酯在胃癌中的抗肿瘤活性并分析可能的作用机制 材料与方法.细胞与仪器 胃癌 细胞(中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心)酶标仪(山东博科仪器公司)流式细胞仪(美国 公司)噻唑蓝粉末、结晶紫粉末(北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司)小室(美国康宁有限公司)细胞凋亡检测试剂盒、二喹啉甲酸蛋白定量试剂盒(江苏碧云天技术有限公司)抗磷酸酶 的癌性抑制因子()、抗蛋白磷酸酶()、抗磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶标复合物()、抗哺乳动物雷帕霉素靶标复合物()、抗 肌动蛋白抗体和辣根过氧化物酶标记的二抗(美国 公司).方法.细胞培养 胃癌 细胞培养于含有胎牛血清的
6、培养基中放置于含有二氧化碳、恒温箱中孵育当细胞密度占培养皿的 左右时用 胰蛋白酶消化细胞按照 的比例进行传代处理.噻唑蓝检测细胞增殖活力收集对数生长期的 细胞按照 /孔的密度接种至 孔板中放置恒温箱中孵育 之后加入氟尿嘧啶使其终浓度为、/同时设置对照组(含有二甲基亚砜)和空白对照组(仅含有培养基不含细胞)放置恒温箱中培养 后在 孔板中加入 噻唑蓝溶液继续孵育 弃去 孔板中的溶液然后滴加 二甲基亚砜溶液在 处检测细胞的吸光度值 细胞存活率()(处理组吸光度值 空白对照组吸光度值)/(对照组吸光度值 空白对照组吸光度值)雷公藤内酯(、/)对 细胞增殖的抑制作用检测方法同上 并采用中位药效法计算 种
7、药物的联合作用指数当联合作用指数 时提示 种药物的联合使用起到协同效应.细胞划痕实验检测细胞迁移能力收集对数生长期的 细胞按照 /孔的密度接种至 孔板中放置恒温箱中孵育 用 的枪头自上至下划出一道划痕显微镜下拍照测量划痕宽度 分别设置对照组(不加药处理)氟尿嘧啶组(加 /的氟尿嘧啶)、雷公藤内酯组(加 /的雷公藤内酯)和联合组(加 /的氟尿嘧啶组和 /的雷公藤内酯)放置恒温箱孵育 然后显微镜下拍照测量划痕宽度 细胞迁移率()(划痕宽度 划痕宽度)/划痕宽度 .实验检测细胞侵袭能力收集对数生长期的 细胞分为对照组(不加药处理)氟尿嘧啶组(加 /的氟尿嘧啶)、雷公藤内酯组(加 /的雷公藤内酯)和联
8、合组(加/的氟尿嘧啶和 /的雷公藤内酯)按照/孔的密度接种至小室上部恒温箱中孵育 后弃去小室上部培养液用棉签擦掉未穿膜的细胞将小室放置含有 多聚甲醛的 孔板中室温固定 再放入含有 结晶紫染色 然后用磷酸盐缓冲液清洗放置显微镜下观察每组选择 个视野拍照判定细胞侵袭率.流式细胞术检测细胞凋亡情况细胞以/孔的密度接种至 孔板中在恒温箱中孵育 后弃旧培养液分别加入含有氟尿嘧啶中国医药 年 月第 卷第 期 ./或雷公藤内酯 /或氟尿嘧啶 /雷公藤内酯 /的新鲜培养液 对照组加入新鲜培养液 继续培养 将细胞收集在 的 管中用磷酸盐缓冲液洗涤加入预冷的乙醇固定 再用磷酸盐缓冲液洗涤按照凋亡试剂盒说明向 管中
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