复方中草药对长江鲟幼鱼免疫、抗氧化及抗病力的影响.pdf
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1、NO.222023饲料研究FEEDRESEARCH49水生动物营养复方中草药对长江鲟幼鱼免疫、抗氧化及抗病力的影响张建明12张德志12田甜1.2舒德斌1,2(1.中国长江三峡集团有限公司中华鲟研究所,湖北宜昌44310 0;2.三峡工程鱼类资源保护湖北省重点实验室,湖北宜昌44310 0)摘要:试验旨在研究复方中草药对长江鲟幼鱼免疫、抗氧化及抗病能力的影响。选择体重(537.6 8 2 5.47)g、体长(46.2 7 土5.7 1)cm的长江鲟幼鱼36 0 尾,随机分为4组,每组3个重复,每个重复30 尾鱼。对照组鱼投喂基础饲料,各试验组分别在基础饲料添加0.5%、1.0%、1.5%复方中草
2、药。试验期2 1d,在试验第14、2 1d分别从各组中随机抽取长江鲟幼鱼2 0 尾,使用嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)进行攻毒试验。结果显示,与对照组相比,试验第7 d,1.5%试验组鱼血清免疫球蛋白M(Ig M)含量显著升高(P0.05);试验第14d,1.0%试验组和1.5%试验组鱼血清免疫球蛋白G(Ig G)、Ig M 含量显著升高(P0.05);试验第2 1d,1.5%试验组鱼血清IgG、IgM含量均高于对照组。与对照组相比,试验第7、14d,1.5%试验组鱼血清补体C4、抗菌肽(AMP)含量及溶菌酶(LSZ)、碱性磷酸酶(AKP)活性显著升高(P0.05);
3、第2 1d时,1.5%试验组鱼血清AMP含量仍显著高于对照组(P0.05)。与对照组相比,试验第7、14、2 1d,1.5%试验组鱼血清超氧化物歧化酶(SOD)活性显著升高(P0.05);试验第14d,1.5%试验组鱼血清过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)活性显著升高(P 0.0 5),丙二醛(MDA)含量显著降低(P0.05);试验第14、2 1d,1.5%试验组鱼血清谷胱甘肽过氧化物酶(G SH-Px)活性显著升高(P0.05);试验第7、14d,1.5%试验组鱼血清总抗氧化能力(T-AOC)显著升高(P0.05)。试验第14、第2 1d,1.0%试验组和1.5%试验组鱼的攻毒死亡
4、率均明显低于对照组。研究表明,复方中草药可提高长江鲟幼鱼免疫、抗氧化和抗病能力,其中以添加量1.5%、投喂14 2 1d为一个疗程效果较好。关键词:长江鲟;中草药;免疫;抗氧化;抗病力中图分类号:S965.1文献标识码:A文章编号:10 0 2-2 8 13(2 0 2 3)2 2-0 0 49-0 6Doi:10.13557/ki.issn1002-2813.2023.22.010Effect of compound Chinese herbal medicineon immunity,antioxidant and disease resistance of juvenile Acipen
5、ser dabryanusZHANG Jian-mingZHANG De-zhiTIAN TianSHU De-binAbstract:The experiment was to study the effect of compound Chinese herbal medicine on the immunity,antioxidantand disease resistance of juvenile Acipenser dabryanus.A total of 360 juvenile Acipenser dabryanus with a body weightof(537.6825.4
6、7)g and a body length of(46.27 5.71)cm were randomly divided into four groups,with threereplicates in each group and 30 fish in each replicate.The fish in the control group were fed with a basic feed,and theexperimental groups were fed with a basic feed supplemented with 0.5%,1.0%and 1.5%compound Ch
7、inese herbalmedicine,respectively.The experiment lasted for 21 d.On 14 and 21 d of the experiment,20 juvenile Acipenserdabryanus were randomly selected from each group,and Aeromonas hydrophila was used for challenge test.The resultsshowed that compared with the control group,the serum IgM content in
8、 the 1.5%experimental group was significantlyincreased on 7 d(P0.05).On 14 d,serum IgG and IgM content in the 1.0%experimental group and the 1.5%experimental group were significantly increased(P0.05).On 21 d,the content of IgG and IgM in the 1.5%experimentalgroup were higher than those in the contro
9、l group.Compared with the control group,the content of serum complement C4DKD第一作者:张建明,硕士,高级工程师,研究方向为中华鲟、长江鲟等长江珍稀特有鱼类物种保护。基金项目:中国长江三峡集团有限公司科技计划项目(项目编号:WWKY-2021-0003、JG/18 0 0 1B)收稿日期:2 0 2 3-0 6-2 9andAMPandthe activitiyofZandAKPinthe1.5%experimental group were significantly increasedon 7,14 d(P0.05
10、).On 21 d,the serum AMP contentof the 1.5%experimental group was still significantlyhigher than those in the control group(P0.05).Compared with the control group,the serum SODNO.222023饲料研究FEEDRESEARCH50水生动物营养activity of the 1.5%experimental group was significantly increased on 7,14,21 d(P0.05).On 14
11、 d,the activitiy of CATand POD in the serum of the 1.5%experimental group was significantly increased(P0.05),while the content of MDAwas significantly decreased(P0.05).On 14,21 d,the serum GSH-Px activity of the 1.5%experimental group wassignificantly increased(P0.05).On 7,14 d,serum T-AOC in the 1.
12、5%experimental group was significantly increased(P0.05).The mortality of the 1.0%experimental group and the 1.5%experimental group on 14,21 d was significantlylower than that of the control group.The study indicates that the compound Chinese herbal medicine can improve theimmunity,antioxidant and di
13、sease resistance of juvenile Acipenser dabryanus,and a course of treatment with a 1.5%supplement for1421 d is more effective.Key words:Acipenser dabryanus;Chinese herbal medicine;immunity;antioxidant;disease resistance长江鲟(Acipenserdabryanus)是我国长江上游特有的淡水定居性鱼类。2 0 世纪后期,因水体污染、过度捕捞、栖息地破坏、幼鱼资源补充不足等原因,长江鲟
14、野生资源量急剧下降1-2 。目前,开展人工养殖、增殖放流是保护长江物种最直接、有效的方式。但人工养殖条件下,长江鲟幼鱼对病原菌易感性提高,会对养殖和增殖放流保护造成不利影响。因此,如何提高长江鲟幼鱼的免疫力和抗病力成为长江鲟物种保护领域的研究热点。中草药因具有资源丰富、价格低廉、不易产生耐药性等优点而广受关注3。研究表明,中草药具有促进鱼类生长4、改善消化吸收功能5、提高抗病能力和保护机体健康6-7 1等功效。利用复方中草药提高鱼类免疫力和抗病力的相关研究已在虹鳟(Oncorhynchus mykiss)8 、杂交(早Acipenser schrenckii Acipenser baeri B
15、randt)0 、大菱鲆(Scophthalmus maximus Linnaeus)【10)、草鱼(Ctenopharyngodon idlla)、胡站(Clarias batrachus)12)等鱼类养殖中广泛开展。但关于中草药在长江鲟物种保护研究领域中的研究鲜见报道。因此,本试验研究复方中草药对长江鲟幼鱼免疫、抗氧化及抗病力的影响,旨在为中草药在长江鲟人工养殖及物种保护等研究领域的应用提供参考1材料与方法1.1试验动物试验鱼为中华研究所自繁自养的长江鲟幼鱼,随机选取鱼体完整、健康无伤、体重(537.6 8 2 5.47)g、体长(46.2 7 5.7 1)cm的长江鲟幼鱼36 0 尾。1
16、.2试验材料基础饲料购自浙江金甲水产饲料有限公司,基础饲料为粉料,其营养水平为粗蛋白43%、粗纤维 5%、粗脂肪5.0%、磷1.0%3.0%、粗灰分18%、钙2.0%5.0%、赖氨酸2.0%。中草药均购自湖北省宜昌市益丰大药房,药材烘干,粉碎,过8 0 12 0 目筛网,按照中草药组方配比混匀(黄芪:白术:防风:山楂:党参:茯苓:甘草=3:2:1:1:1:1:0.5)1.3饲养管理试验在直径2 m、水深0.6 m的水泥池内进行,流水模式培育试验鱼,试验用水为井水,试验期2 1d。试验期间养殖水温2 1.8 2 3.5。定时监测养殖水体水质指标,通过排污、换水等措施确保养殖水质指标符合养殖需求。
17、1.4试验设计将36 0 尾长江鲟幼鱼随机分为4组,每组3个重复,每个重复长江幼鱼30 尾,对照组、0.5%试验组、1.0%试验组和1.5%试验组分别在基础饲料中添加0、0.5%、1.0%、1.5%配制好的复方中草药。试验前暂养阶段,4组试验鱼均投喂基础饲料(日投喂量为体重的0.50%0.75%)。7 d 后正式试验,按照试验设计中草药添加量配制试验饲料,对照组不添加任何药物,连续投喂2 1d。1.5测定指标及方法1.5.1样品采集试验第7、14、2 1d时分别采样,每个试验组随机取试验鱼15尾,低温麻醉、尾静脉采血,2 50 0 r/min离心15min,血清样本于-8 0 冰箱保存。1.5
18、.2血清生化指标血清样本指标采用双抗体夹心法测定,检测试剂盒购自上海酶联生物科技有限公司,参照说明书步骤进行指标检测。抗氧化指标包括:超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)。免疫指标包括:免疫球蛋白G(Ig G)、免疫球蛋白M(Ig M)、补体C3、补体C4、碱性磷酸酶(AKP)、溶菌酶(LSZ)、抗菌肽(TP)1.5.3攻毒试验在对比投喂试验的第14、2 1d,分别开展攻毒试验。试验期间不投喂饲料。试验第14、2 1d分别从各试验组中随机抽取长江鲟幼鱼,用嗜水气单胞菌(A e r
19、o mo n a s h y d r o p h i l a,本实验室保留的病原菌)做攻毒试验。攻毒试验前用不同浓度梯度的嗜水气单胞菌菌液做预试验,筛选出半致死浓度(LDso)进行攻毒试验。每组分别取长江鲟幼鱼2 0 尾,按照10 0 g体重胸鳍基部注射0.5mL生理盐水悬浮的嗜水气单胞菌NO.222023饲料研究FEEDRESEARCH51水生动物营养(浓度为110 CFU/mL),注射后统计7 d内各组累计死亡的数量,计算死亡率。死亡率=(试验初尾数-试验末尾数)/试验初尾数100%(1)1.6数据统计与分析试验数据采用SPSS25.0软件和Excel软件进行单因素方差分析,Duncans
20、法进行多重比较。结果以“平均值标准差”表示,P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1复方中草药对长江鲟幼鱼免疫指标的影响(见表1 表7)由表1可知,与对照组相比,试验第14d,1.0%试验组和1.5%试验组鱼血清IgG含量显著升高(P0.05),不同字母表示差异显著(P0.05);下表同。由表2 可知,与对照组相比,试验第7 d,1.5%试验组鱼血清IgM含量显著升高(P0.05);试验第14d,1.0%试验组和1.5%试验组鱼血清IgM含量显著升高(P0.05)。第7、14、21d,1.0%试验组和1.5%试验组鱼血清C3含量呈先升高后降低的趋势,以试验第14d时最高。表3中草药对长江鲟血
21、清C3含量的影响单位:mg/L组别第7 d第14d第2 1d对照组142.41 20.03140.14 24.21142.91 15.340.5%试验组128.2212.97160.06 19.98143.82 14.111.0%试验组135.72 15.29152.99 17.35147.75 12.081.5%试验组137.57 24.89164.35 23.25153.72 26.19由表4可知,试验第7、14d,1.5%试验组鱼血清C4含量显著高于对照组1(P0.05)。表4中草药对长江鲟血清C4含量的影响单位:mg/L组别第7 d第14d第2 1d对照组215.84 10.92ab1
22、95.14 9.07a203.39 15.720.5%试验组214.08 10.38a208.408.84a204.85 20.911.0%试验组218.14 10.47ab212.85 9.36a205.41 13.231.5%试验组236.63 13.53b238.57 7.64b213.52 21.85由表5可知,与对照组相比,试验第7、14d,1.5%试验组鱼血清LSZ活性显著升高(P 0.0 5)。表5中草药对长江鲟血清LSZ的影响单位:U/L组别第7 d第14d第2 1d对照组4.96 1.52a5.55 1.92a5.65 1.270.5%试验组5.47 0.31a5.51 0.
23、24a5.57 1.461.0%试验组5.59 0.33a5.67 0.27ab5.28 1.311.5%试验组6.78 0.70b7.05 0.73b6.20 0.89由表6 可知,与对照组相比,试验第7、14d,1.5%试验组鱼血清AMP含量显著升高(P0.05);第21d有所下降,但仍处于显著水平(P0.05);1.0%试验组鱼血清AMP含量仅在第14d时显著升高(P0.05)。表6中草药对长江鲟血清AMP含量的影响单位:mg/L组别第7 d第14d第2 1d对照组5.49 0.93a5.09 0.74a5.39 1.76a0.5%试验组5.56 0.32a5.78 0.41ab5.49
24、 1.31a1.0%试验组5.88 0.53ab6.78 1.24b6.74 1.41ab1.5%试验组6.68 0.49b8.66 0.64c7.85 1.47b由表7 可知,与对照组相比,试验第14d,1.5%试验组鱼血清AKP活性显著升高(P0.05)。表7中草药对长江鲟血清AKP活性的影响单位:U/L组别第7 d第14d第2 1d对照组80.64 20.5282.00 14.73a83.42 14.560.5%试验组81.15 19.5482.41 15.07a85.87 22.821.0%试验组86.55 19.93102.76 17.42ab87.23 17.621.5%试验组10
25、2.36 19.32110.41 17.17b91.86 20.122.2复方中草药对长江鲟幼鱼抗氧化指标的影响(见表8 表13)表:中草药对长江鲟血清SOD活性的影响单位:U/mL组别第7 d第14d第2 1d对照组84.91 10.66a92.89 12.11a88.05 17.61a0.5%试验组86.24 11.22a99.50 10.93ab84.22 15.20a1.0%试验组103.39 17.19ab105.17 16.58ab95.31 12.60ab1.5%试验组122.88 25.50b121.13 28.38b112.24 15.54b1NO.222023饲料研究FEE
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