复方降糖玉液调节JAK2_STAT3_SOCS-1通路对糖尿病肾损伤大鼠的保护作用研究.pdf
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1、复方降糖玉液调节/通路对糖尿病肾损伤大鼠的保护作用研究古丽努尔艾尼刘春丽王彦娥(新疆医科大学第一附属医院新疆 乌鲁木齐)摘要 目目的的 基于酪氨酸蛋白激酶()/信号传导及转录激活因子()/细胞因子信号抑制物()通路研究复方降糖玉液对糖尿病肾损伤大鼠的保护作用机制 方方法法 随机从 只雄性 大鼠中取 只作为空白组其余大鼠采用高糖高脂饲料联合链脲佐菌素()法建立糖尿病肾损伤模型 将造模成功大鼠随机分为模型组、厄贝沙坦组及复方降糖玉液低、中、高剂量组每组 只 复方降糖玉液低、中、高剂量组分别给予./、/、/(以生药含量计)复方降糖玉液灌胃厄贝沙坦组给予厄贝沙坦 /灌胃均 次/连续灌胃 周 收集 尿液
2、测定 尿蛋白定量尾静脉取血测定空腹血糖水平腹主动脉取血测定糖化血红蛋白、尿素氮()、血肌酐()水平取肾组织计算肾指数 法测定肾组织中肿瘤坏死因子()、白细胞介素()、单核细胞趋化蛋白 ()含量 染色法观察肾组织病理学形态 染色法测定肾组织细胞凋亡率 法测定肾组织中 、及 蛋白表达情况 结结果果 与空白组比较模型组大鼠 尿蛋白定量、空腹血糖、糖化血红蛋白、肾指数、肾组织细胞凋亡率及肾组织中 、含量和 /、/比值均明显升高(均 .)肾组织中 蛋白相对表达量明显降低(.)肾组织炎症浸润、肾小管扩张与模型组比较复方降糖玉液各组及厄贝沙坦组大鼠 尿蛋白定量、空腹血糖、糖化血红蛋白、肾指数、肾组织细胞凋亡
3、率及肾组织中 、含量和 /、/比值均明显降低(均.)肾组织中 蛋白相对表达量均明显升高(均.)肾组织炎症浸润明显减轻且各项指标随着复方降糖玉液剂量的增加变化更明显 结结论论 复方降糖玉液能够有效控制糖尿病肾损伤大鼠血糖水平改善肾功能抑制肾组织病理进展及肾组织细胞凋亡其机制可能与调节/通路有关关键词 糖尿病肾损伤复方降糖玉液酪氨酸蛋白激酶 信号传导及转录激活因子 细胞因子信号抑制物:./.中图分类号 文献标识码 文章编号 ()作者简介 古丽努尔艾尼女硕士研究方向为糖尿病药物机制研究基金项目 新疆维吾尔自治区自然科学基金资助项目()/():()()/()/().().现代中西医结合杂志 ().()
4、./.()()()()()./()(.)./(.)(.)./.:/糖尿病肾损伤是糖尿病进展过程中常见的并发症临床以肾小球滤过率降低及蛋白尿为主要特征随着疾病进展会发展成为肾衰竭危及患者生命目前研究认为糖尿病肾损伤的发生发展与糖代谢异常、肾脏血流动力学改变、肾组织氧化应激损伤、肾脏中异位脂肪沉积等多种因素有关 酪氨酸蛋白激酶()/信号传导及转录激活因子()/细胞因子信号抑制物()通路是近年来研究发现的与糖尿病肾损伤密切相关的信号通路调节该通路及相关蛋白的异常表达能够显著修复糖尿病大鼠肾组织损伤 复方降糖玉液是基于中医理论由多种中药材组成的中药成方制剂临床用于糖尿病及其并发症的治疗疗效较好本研究通
5、过动物实验观察了复方降糖玉液对糖尿病肾损伤的修复作用及对/通路的影响旨在明确其药理作用为其临床应用提供理论依据 实验材料与方法 实验动物 雄性 大鼠 只 周龄体重 购自新疆医科大学实验动物中心实验动物许可证号:(新)饲养环境温度 相对湿度 昼夜交替 自由饮食 设备与仪器 荧光倒置显微镜(日本 公司)酶标仪(美谷分子仪器有限公司)石蜡切片机(深圳市瑞沃德生命科技有限公司)全自动生化分析仪(山东博科生物产业有限公司)电子天平(奥豪斯国际贸易有限公司)凝胶成像仪(美国 公司)高速冷冻离心机(上海迈皋科学仪器有限公司)药品及试剂复方降糖玉液(新疆医科大学第一附属医院制剂由黄芪 、生晒参 、制首乌 、黄
6、精 、生地 、三七 、天花粉 组成批号:)厄贝沙坦(海正辉瑞制药有限公司批号:规格:/片)高糖高脂饲料(北京博泰宏达生物技术有限公司货号:)肿瘤坏死因子 ()试剂盒(武汉菲恩生物科技有限公司货号:)白细胞介素()试剂盒(上海酶研生物科技有限公司货号:)单核细胞趋化蛋白()试剂盒(上海继和生物科技有现代中西医结合杂志 ()限公司货号:)(货号:)、(货号:)、(货号:)、(货 号:)、(货 号:)、(货号:)兔单克隆抗体(艾博抗贸易有限公司)辣根过氧化物酶标记山羊抗兔(艾博抗贸易有限公司货号:)二喹啉甲酸()蛋白测定试剂盒(货号:)、试剂盒(货号:)、染色试剂盒(货号:)、磷酸盐缓冲液(货号:)
7、(北京索莱宝科技有限公司)蛋白酶(碧云天生物科技有限公司货号:)含 抗荧光淬灭封片液(碧云天生物科技有限公司货号:)实验方法随机取 只大鼠作为空白组其余 只大鼠参考文献 方法建立糖尿病肾损伤模型:采用高糖高脂饲料喂养 周后大鼠禁食 一次性腹腔注射链脲佐菌素()/大鼠继续喂养 采尾静脉血测定血糖(采血前大鼠禁食 )以血糖/视为糖尿病模型建立成功继续喂养 周并收集 尿液测定尿蛋白量以空腹血糖./同时 尿蛋白量/视为糖尿病肾损伤造模成功 将造模成功大鼠随机分为模型组、厄贝沙坦及复方降糖玉液低、中、高剂量组每组 只 复方降糖玉液低、中、高剂量组按照成人给药剂量的.倍计算分别给予./、/、/(以生药含量
8、计)复方降糖玉液灌胃厄贝沙坦组参考文献 给予厄贝沙坦./灌胃空白组及模型组给予生理盐水灌胃均 次/连续 周 检测指标及方法 尿蛋白定量及空腹血糖 末次灌胃后收集各组大鼠 尿液测定 尿蛋白定量 末次灌胃后 禁食 尾静脉取血血糖仪测定空腹血糖水平 糖化血红蛋白及肾功能指标 大鼠称重后采用 水合氯醛麻醉大鼠腹主动脉取血至干净离心管全自动生化分析仪测定糖化血红蛋白、尿素氮()、血肌酐()水平 肾指数及肾组织中 、含量处死大鼠取肾组织并称重计算肾指数肾指数 肾质量()/体重()取肾组织研磨匀浆后离心取上清使用相应试剂盒测定 、含量 肾组织病理形态分离肾组织制成 石蜡切片常规 染色置于显微镜下进行病理学观
9、察 肾组织细胞凋亡情况 取制备好的 石蜡切片使用二甲苯脱蜡后梯度乙醇至水滴加/的蛋白酶 抗原修复后磷酸盐缓冲液清洗 次滴加 的 染色液 条件下避光孵育 再次使用磷酸盐缓冲液清洗 次滴加含有 的抗荧光淬灭剂盖上盖玻片置于荧光显微镜下进行观察拍照 细胞凋亡率 阳性细胞数/总细胞数 肾 组 织 中、及 蛋白表达情况 取肾组织研磨匀浆后离心取上清试剂盒测定蛋白含量并取含有 蛋白的上清液经电泳分离、转膜及脱脂牛奶封闭后用、兔抗体按照 稀释后 孵育过夜 清洗并用山羊抗兔二抗在室温下按照 稀释后孵育 使用化学发光液在凝胶成像系统拍照以 为内参 .计算、蛋白相对表达量 统计学方法所有数据使用 .软件进行分析处
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