DB4228∕T 57-2021 甘薯脱毒种薯规范化生产技术规程(恩施土家族苗族自治州).pdf
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1、ICS 65.020.01B23DB4228恩 施 土 家 族 苗 族 自 治 州 地 方 标 准DB 4228/T 572021甘薯脱毒种薯规范化生产技术规程Technical specification for standardized productionof virus-free tubers of sweet potato2021 - 01 - 28 发布2021 - 04 - 28 实施恩施土家族苗族自治州市场监督管理局发 布DB4228/T 572021I目录前言.II1范围.12规范性引用文件.13术语和定义.14脱毒组培苗快繁.25水培壮苗生产.36原原种生产.47原种生产.
2、58生产用种生产.5附录 A(资料性附录)MS 培养基贮备液的配制. 6附录 B(资料性附录)水培营养液贮备液的配制. 7DB4228/T 572021II前言本标准按GB/T 1.1-2020给出的规则起草。本标准附录A、附录B为资料性附录。本标准由恩施土家族苗族自治州农业科学院提出并归口管理。本标准主要起草单位:恩施土家族苗族自治州农业科学院、湖北恩施中国南方马铃薯研究中心、恩施土家族苗族自治州农业技术推广中心、湖北清江种业有限责任公司、来凤三丰时代农业有限公司、巴东县神峰薯业开发有限公司。本标准主要起草人:程群、瞿勇、徐怡、陈巧玲、叶兴枝、沈艳芬、高剑华、李求文、杨国才、郝苗、宋威武、王
3、甄、张等宏、闫雷、陈火云、陈家吉、杨晓华、张良、尹鑫、谷勇、赵锦慧、李雪晴、曾珍。DB4228/T 5720211甘薯脱毒种薯规范化生产技术规程1 范围本规程规定了甘薯脱毒组培苗的术语及定义、脱毒组培苗快繁、水培壮苗生产、原原种生产、原种生产及生产用种生产等。本规程适用于恩施州甘薯脱毒种薯的标准化生产。2 规范性引用文件下列文件对于本标准的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件, 仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于该标准。GB 5084农田灌溉水质标准GB 15618土壤环境质量标准NY/T 402脱毒甘薯种薯(苗)病毒检测技术规程NY
4、/T 1200甘薯脱毒种薯NY/T 3537甘薯脱毒种薯(苗)生产技术规程3 术语及定义下列术语和定义适用于本文件。3.1 脱毒组培苗 virus-free tissue culture plant简称脱毒苗,是应用茎尖组织培养技术获得的、经检测确认不带甘薯羽状斑驳病毒(Sweet potatofeathery mottle virus, SPFMV)、甘薯潜隐病毒(Sweet potato latent virus, SPLV)、甘薯黄矮病毒(Sweetpotato yellow dwarf virus C, SPYDV)、甘薯明脉病毒(Sweet potato veinc-learing
5、virus G, SPVCV)、甘薯轻斑驳病毒(Sweet potato mild mottle virus, SPSMV)的试管苗。3.2 水培壮苗 hydroponic seedling脱毒组培苗切段在温室扦插成活,剪取其主茎及侧枝两叶一心扦插成活的苗。3.3 脱毒种薯 virus-free seed roots从繁殖脱毒苗开始, 通过生产水培苗经逐代繁殖增加种薯数量的种薯生产体系生产出来的各级种薯。脱毒种薯分为原原种、原种和生产用种。3.4 原原种 pre-elite利用组培苗及水培苗在温室条件和 60 目防虫网室下生产的符合 NY/T 1200 的种薯。3.5 原种 eliteDB42
6、28/T 5720212用原原种作种薯,在大于 500m 隔离条件下生产的符合 NY/T 1200 的种薯。3.6 生产用种 certified seed用原种作种薯,在大于 500m 隔离条件下生产出的符合 NY/T 1200 的种薯。4 脱毒组培苗快繁4.1 外植体处理选择经过品种登记且适宜本地区大面积推广的高产优质或具有区域特殊用途的甘薯品种,质量符合NY/T 1200 的要求。将选取的薯块在温室育苗,当苗高 20 cm 左右,选取茎顶端 2 cm 长芽段,剪去肉眼可见叶片,用自来水冲洗 30 min,经 70%酒精浸泡 25 s,再用 0.1%氯化汞溶液消毒 30 s ,5%次氯酸钠溶
7、液消毒处理 10 min,无菌水冲洗 3 遍。4.2 茎尖分生组织培养4.2.1 培养基的制备在每l000 ml MS培养基(见附录A)中加GA30.5 mg、6-BA 0.5 mg、IAA 0.1 mg分装入管。4.2.2 茎尖拨离接种在超净工作台上体视显微镜下用手术刀等工具剥去幼叶, 切取带l2个叶原基 (约0.2 mm0.4 mm)的茎尖,接种到MS加激素的培养基试管中,每管放1个茎尖,注明品种,茎尖号,接种日期。4.2.3 组织培养在温度28、光照16h/d、光照强度20003000Lx的条件下培养。25d后茎尖愈伤组织形成,转入广口瓶MS无激素培养基上继续培养50d60d,当幼苗长出
8、57片叶时,进行扩繁。4.3 病毒检测采用症状学诊断法、 酶联免疫吸附检测法、 指示植物检测法检测病毒, 根据检测结果出具检验报告,脱毒组培苗未检出甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)、甘薯潜隐病毒(SPLV)、甘薯黄矮病毒(SPYDV)、甘薯明脉病毒(SPVCV)、甘薯轻斑驳病毒(SPSMV)等病毒则批准进行组培苗生产。4.3.1 目测法先用症状学诊断法全面观察组培茎尖苗的长势长相,将长势弱,叶片黄化、 黄脉和花叶等症状明显的带毒苗淘汰去除。4.3.2 酶联免疫吸附检测法当单株的试管苗长至展开叶达6片以上时检测,按株取其上、中、下部叶片用于酶联免疫吸附检测。用酶联免疫检测法初检后,淘汰显阳性反应的
9、单株。检测方法参照NY/T 402执行。4.3.3 指示植物检测法通过酶联免疫检测的健康植株继续扩繁, 再用指示植物检测法将生长可疑的茎尖苗嫁接在巴西牵牛上,15 d后观察结果。检测方法参照NY/T 402中指示植物检测法进行。DB4228/T 57202134.3.4 脱毒苗复检随机抽取1 %2 %脱毒试管苗再次检测,经酶联免疫法检测淘汰阳性反应株后,再经指示植物检测确无症状后,可用于扩大繁殖,检测方法参照NY/T 402测定。继代扩繁中选的脱毒苗,每年至少作一次病毒复检。4.4 组培苗继代增殖培养经过病毒检测无病毒的试管苗,在无菌条件下按1叶1节切段,移入装有MS培养基的广口瓶中,在温度2
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