顶空-气相色谱法测定阿糖胞苷原料药中基因毒杂质氯甲烷和氯乙烷.pdf
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1、 ,评价技术与方法 作者简介 杨海洋,男,硕士,研究方向:药物分析。:通讯作者 林妮妮,女,博士,研究方向:药物分析、痕量杂质检测。:顶空 气相色谱法测定阿糖胞苷原料药中基因毒杂质氯甲烷和氯乙烷杨海洋,王策,林妮妮(北京新领先医药科技发展有限公司,北京 )摘要 目的:建立一种准确测定阿糖胞苷原料药中基因毒杂质氯甲烷和氯乙烷含量的气相色谱方法。方法:采用顶空气相色谱法,以氢火焰离子化检测器()为检测器,毛细管柱为色谱柱,二甲基甲酰胺()为溶剂。检测器温度为 ,进样口温度为 ,柱温为程序升温。顶空平衡温度为 ,顶空平衡时间为 。结果:氯甲烷和氯乙烷分别在 和 范围内呈现良好的线性,相关系数 分别为
2、 和 ;检测限浓度分别为 和 ;低、中、高 个浓度的加标回收率分别介于 、间;重复性试验的相对标准偏差分别为 和 。氯甲烷和氯乙烷的系统适用性、专属性和进样精密度均良好。结论:本方法操作简单,灵敏度高,成本较低,在阿糖胞苷原料药中的氯甲烷和氯乙烷的质量控制具有重要的现实意义,对于盐酸盐类原料药中氯甲烷、氯乙烷的质量控制具有重要参考价值。关键词 顶空 气相色谱;阿糖胞苷;基因毒杂质;盐酸盐原料药;氯甲烷;氯乙烷 中图分类号 文献标志码 文章编号 (),(,):():(),(),:,、(,),:,;阿糖胞苷()为嘧啶类抗代谢药物,属于盐酸盐类原料药,其作用机理是通过抑制细胞 的合成干扰细胞增殖,是
3、目前治疗急性髓细胞白血病最常用药物之一 ,。在其生产、提取、纯化过程中会使用甲醇、乙醇作为溶剂,当工艺中使用盐酸时,盐酸会和甲醇、乙醇发生亲核取代反应,生成氯甲烷和氯乙烷,故原料药中可能有氯甲烷和氯乙烷的残留。年第 卷第 期氯甲烷与氯乙烷是盐酸盐类原料药中常见的需要 控 制 的 杂 质,属 于 卤 代 烷 烃,具 有 基 因 毒性 。基因毒性杂质是一种有着重大安全风险的杂质,即使在较低浓度下,也可能诱导基因突变和染色体损伤,甚至导致癌症并危及生命。为此,各国相关机构对基因毒性杂质的研究愈加重视,并相继出台相关指导原则 ,中国药典 年版(四部)中也新增 遗传毒性杂质控制指导原则 ,。目前关于阿糖
4、胞苷的含量测定和有关物质研究已有较多文献报道 ,但未见阿糖胞苷原料药中氯甲烷与氯乙烷检测的相关报道。本文参考 指导原则 ,根据毒理学关注阈值(),制定氯甲烷和氯乙烷的限度分别为 和 ;采用顶空 气相色谱法,建立测定阿糖胞苷原料药中氯甲烷和氯乙烷的检测方法,该方法操作简单,灵敏度高,成本较低,在其质量控制方面具有重要的现实意义,为盐酸盐类原料药中氯甲烷、氯乙烷的检测提供技术参考。材料与方法 仪器与试剂 型气相色谱仪 安捷伦科技(中国)有限公司;型气相色谱仪 岛津(中国)有限公司;型电子分析天平 赛多利斯科学仪器(北京)有 限 公 司;阿 糖 胞 苷 原 料 药(批 号:、)由新领先医药科技有限公
5、司提供;氯甲烷(批号 ,纯度 )购自萨恩化学技术(上海)有限公司;氯乙烷(批号 ,纯度 )购自梯希爱(上海)化成工业发展有限公司;,二甲基甲酰胺(批号 ,色谱纯)购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司。溶液配制单一贮备母液:精密称取氯甲烷、氯乙烷各适量,分别用 ,二甲基甲酰胺溶解并定量稀释,制成每 各约含 氯甲烷和 氯乙烷的溶液。贮备液:精密量取单一贮备母液各 ,置 量瓶中,定容稀释至刻度,摇匀,即得。对照品溶液:精密量取贮备液 ,置 量瓶中,定容稀释至刻度,摇匀,即得。供试品溶液:精密称取本品约 ,置顶空瓶中,精密加入 ,二甲基甲酰胺 ,密封。色谱条件使用 ()毛细管色谱柱;载气流量为 ;分流比
6、为 ;进样口温度为 ;检测器为氢火焰离子化检测器();检测器温度为 ;升温程序:初始柱温,维持 ,以 速率升温至 ,维持 ;进样方式为顶空进样;顶空平衡温度为 ,顶空平衡时间为 。结果与分析 系统适用性和专属性试验精密量取空白溶液 ,置顶空瓶中,密封,连同“”项下对照品溶液、供试品溶液,照“”项下色谱条件进样并记录色谱图(图 )。由图 可知,空白溶液、供试品均不干扰氯甲烷、氯乙烷的检测;各待测物的理论板数均不低于 ,拖尾因子均接近 ,说明本法检测各待测物的系统适用性和专属性均良好。:对照品溶液(:氯甲烷;:氯乙烷);:空白溶液;:供试品溶液图 专属性考察气相色谱图 ,评价技术与方法 灵敏度试验
7、精密量取上述单一贮备母液各适量,逐级稀释,照“”项下色谱条件进样分析,分别以信噪比()约 和 作为定量限溶液和检测限溶液。结果:氯甲烷、氯乙烷定量限浓度分别为 、,检测限浓度分别为 、。线性试验以定量限溶液为 号线性溶液,精密量取上述贮备液 、和 ,分别置于 量瓶中,稀释至刻度,摇匀,即得 号线性溶液。精密量取各线性溶液 ,分别置顶空瓶中,密封,照“”项下色谱条件测定,并记录峰面积。以对照品浓度为 ,以峰面积为 ,进行线性回归,氯甲烷的线性方程为 ,相关系数 ;氯乙烷的线性方程为 ,相关系数 ,说明本法检测氯甲烷在 浓度范围内,线性关系良好,氯乙烷在 浓度范围内,线性关系良好。进样精密度试验精
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