东北野猪IFN OMEGA-2基因的克隆测序和遗传多样性分析.pdf
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1、118猪业科学 SWINE INDUSTRY SCIENCE 2023年40卷第7期地方猪种INDIGENOUS BREEDS东北野猪 IFN OMEGA-2 基因的克隆测序和遗传多样性分析王文涛 1,张冬杰 1,何鑫淼 1,龚林明 2,亓美玉 1,张海峰 1,何海娟 1,吴赛辉 1,冯艳忠 1,陈赫书 1,田 明 1,刘自广 1,李忠秋 1,李 淼 1,刘 娣 1*(1.黑龙江省农业科学院畜牧研究所,黑龙江 哈尔滨 150086;2.伊春宝宇农业科技有限公司,黑龙江 伊春 153000)干扰素 OMEGA-2(IFN-2)基因属于 型干扰素,在结构、来源方面为型,根据前期研究发现猪的 IFN
2、-2 基因位于1 号染色体,处于其染色体长臂的 187329341187329913 位置,赵光伟研究团队针对荣昌猪 IFN 基因研究中发现 IFN-基因具有良好的抗原性,能够增强荣昌猪的免疫力,与 Xin Zhao 研究团队研究结果相似,推测其具备在提高机体免疫调节能力、抵御病毒侵染过程中发挥重要作用。本 研 究 针 对 东 北 野 猪 IFN OMEGA-2 基因进行克隆测序,并与民猪、大白猪基因序列进行比对,同时进行遗传多样性分析。1 材料与方法1.1 试验材料采集黑龙江省小兴安岭地区东北野猪耳组织样品 23 个,采集后液氮保存,运输至黑龙江省农业科学院畜牧研究所种养结合重点实验室。1.
3、2 试验方法 1.2.1 DNA 提取选取 50 100 mg 东北野猪样品,采用常规提取 DNA 酚抽提法进行 DNA 提取,提取后检测 DNA质量,使用分光光度计检测时,基金项目:国家现代农业产业技术体系(CARS-36)作者简介:王文涛(1981),男,副研究员,博士,研究方向为猪遗传育种与繁殖,E-mail:*通信作者:刘娣(1963),女,研究员,博士,研究方向为猪遗传育种与繁殖,E-mail:OD260/280应在1.701.90范围内,采用 1%琼脂糖凝胶电泳法检测时,条带显示效果应满足无拖尾,且整齐清晰等条件。1.2.2 引物设计引物设计参照 NCBI(NM_001166322
4、)-猪 IFN OMEGA-2 基因序列,上游引物序列(5-3):CAA GGT TCC CTC AGA CAC CCA TC;下 游 引 物 序列(5-3):TTA CTC AAA TTA TTT CAA TAA GTT C,总 计 扩 增731 bp。1.2.3 PCR 反应体系根据预试验结果,确定 PCR 反应体系,包括浓度 50 ng L-1 的样品 DNA 添加量为 1 L,上游引物添加量为 1 L、下游引物添加量为 1 L,上下游引物浓度为10 pmol L-1,10 PCR 缓冲液添加量为 2 L,rTaq DNA 聚合酶添加量为 1 L,dNTPs 添加量为2 L,ddH2O
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