滇白珠的化学成分、药理活性及质量控制研究.pdf
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1、Technique express科技广场62Vol.46 No.9 Sep.2023滇白珠是一种典型的传统民族药材,又称为“透骨草、黑油果、登能”等,属于杜鹃花科白珠树属植物,其始载于明初的滇南本草一书中。其全草均有药用价值,具有祛风除湿、清热解毒、活血化瘀和顺气平喘等多种功效。随着现代医学技术的进步,对滇白珠做了进一步分离与研究,目前已从中分离出83种化学成分,包括水杨酸甲酯糖苷类、黄酮类、木脂素类、挥发油类以及有机酸类等。现代药理学研究证明,滇白珠中的有效化学成分,在抗炎、镇痛、抗氧化、止泻等方面的药理活性较为突出,同时滇白珠的特殊香型也使其在香料工业中得到普遍应用,受到了广泛的关注与研
2、究。本次研究将在已有文献资料基础上,进一步探寻其化学成分、药理作用和质量控制策略,从而为其进一步研究和开发利用提供科学依据1。1 实验部分1.1 材料与仪器滇白珠药材样品,采集自云南某地,经有关专家鉴定后,确认其为滇白珠;乙醇、乙腈、甲酸、磷酸,分析纯,国药集团化学试剂有限公司;去离子水,实验室自制。KQ-500E型超声波清洗器,昆山超声仪器公司;DS型电热三用水浴锅,北京医疗设备厂;PL303型电子分析天平,梅特勒-托利多;Agilent-1200高效液相色谱仪,美国安捷伦。1.2 滇白珠化学成分分析使用粉碎机将滇白珠药材样品打碎为粉末,过20目筛,精密称取1.0 g,加入50%乙醇水溶液2
3、0 mL;室温下超声波清洗器提供超声环境,对液相进行60 min处理、摇匀。将混匀后的混合液过0.22 m滤膜,即得样品溶液,而后选取少量样品溶液进行HPLC分析。采用Thermo Hypersil Gold C18色谱柱进行分析,流动相组成:0.5%乙酸水溶液和乙腈混合物,梯度洗脱条件:012 min,10%B;1225 min,10%20%B;2540 min,20%B;4050 min,20%60%B;5055 min,60%75%B,流速:1.0 mL/min,进样量:10 L,检测波长经全波长扫描后确定为290 nm。1.3 滇白珠药理活性分析根据文献2可知,在滇白珠中,水杨酸甲酯糖
4、苷类化合物(对应2.1中所分离得到的“化合物4”)在抗炎镇痛活性上的表现相对较为优异,且其化学结构与阿司匹林相似,滇白珠的化学成分、药理活性及质量控制研究江明明,薛金林,周 菊(青岛黄海制药有限责任公司,山东 青岛 266100)摘 要:应用有机化学分析方法,以HPLC为分析工具,对滇白珠的主要化学成分进行初步分析,提取有效化学成分;而后通过药理活性实验,对滇白珠的药理活性进行测试,结果显示,滇白珠地上部分对J774巨噬细胞株的抑制作用最为突出,其主要源于水杨酸甲酯糖苷类化合物、滇白珠素A和滇白珠素B的作用。在此基础上,结合当前滇白珠变种较多易混淆的现状,从多个角度入手提出质量控制方面的相关建
5、议,以期为今后的滇白珠研究与应用提供参考。关键词:滇白珠;化学成分;药理活性;质量控制中图分类号:R284 文献标识码:A 文章编号:1006-7264(2023)09-062-04DOI:10.3969/j.issn.1006-7264.2023.09.010收稿日期:2023-06-12作者简介:江明明(1989-),女,山东人,工程师,硕士,E-mail:。Technique express科技广场63第46卷2023年第9期因此研究界通常认为,该物质是滇白珠的药效物质基础,其作用机制主要与抑制炎症介质的产生和分泌、自由基的产生及细胞因子的产生有关3。同时,也有研究指出,巨噬细胞系统的活
6、性直接决定着炎症反应的程度,当巨噬细胞系统活性过高时,其处于“亢奋状态”,必须引入相关药物发挥拮抗作用,才能使得炎症得到明显抑制4.5。基于此,在本环节的研究中,为实现滇白珠药理活性优势的最大化,以滇白珠的不同部位为变量,并以J774小鼠巨噬细胞为研究对象,研究不同部位滇白珠在抗炎镇痛活性上的差异。1.4 试验用细胞培养方法在本次实验中,主要选用P7级别的J774巨噬细胞,将90%以上汇合的细胞加入2 mL PBS液体进行清洗,再加入2 mL胰酶进行消化处理。待细胞完全脱离瓶壁而分散后,加2 mL培养液混匀,离心后除去上清液,再加4 mL培养液,将其吹打均匀,分瓶,每瓶1 mL。然后每瓶再加6
7、 mL培养液,置于37、5%CO2培养箱中进行培养。2 结果与讨论2.1 滇白珠主要化学成分鉴定经过反复分离、纯化和洗脱后,共获得7种化合物,编号为17。使用核磁共振氢谱、红外光谱等对其进行综合鉴定,同时文献对波谱数据进行对比分析6,7,得到鉴定结果如下:化合物1为槲皮素-3-O-D-葡萄糖醛酸苷,其在甲醇环境下为黄色结晶状物;化合物2为山奈酚-3-O-D-葡萄糖醛酸苷,其在甲醇环境下为黄色结晶状物;化合物3为龙胆酸甲酯,其在甲醇环境下为白色结晶;化合物4为水杨酸甲酯糖苷类化合物,其在甲醇环境下为白色结晶体;化合物5为白珠苷类化合物,其在室温环境下为无定型白色粉末状物;化合物6为滇白珠素A,其
8、在室温环境下为无定型白色粉末状物;化合物7为滇白珠素B,其在室温环境下为无定型白色粉末状物1,2。2.2 实验参数优化考虑到滇白珠中多种化学成分均不易溶于水,需要使用DMSO(二甲基亚砜)溶解,而过高浓度的DMSO又容易给细胞带来额外的毒害作用,进而影响实验准确性。因此在实验中,研究人员选定对细胞无毒的DMSO浓度进行测试。选用生长情况较为良好的J774巨噬细胞,经胰酶消化后,使用10%胎牛血清悬浮液进行调整,确保细胞数为150 个/L。加至96孔细胞培养板中,在37、5%CO2的环境下培养24 h,至细胞长成单层后移除培养液,并使用培养液将DMSO分别稀释为5%、2%、1%、0.5%、0.2
9、%、0.1%和0.05%。分别等量加入各个细胞孔,在37、5%CO2环境下培养24 h,而后在酶联免疫监测仪上测定各个孔吸光度,结果见图1(图中系列1为对照组,使用去离子水作为空白对照)。图1 不同浓度DMSO对细胞的毒性影响Fig.1 ToxiceffectsofdifferentconcentrationsofDMSOoncells由图1可知,当DMSO浓度低于0.2%时,未对细胞造成明显毒性影响,因此确定DMSO浓度为0.2%。2.3 滇白珠不同部位对 J774 细胞增殖的影响在细胞培养完成后,取适量生长较好的J774巨噬细胞,经胰酶消化后,使用10%胎牛血清悬浮液进行调整,确保细胞数为
10、100 个/L,加至96孔细胞培养板中。分别取滇白珠地下部位、地上部位和全株,分别使用70%乙醇溶液提取浸膏,加入DMSO配制不同浓度的含药溶液,振荡均匀后放置于培养J774巨噬细胞的孔板中,考察滇白珠不同部位对J774巨噬细胞株增值的影响,实验结果见表1。120系列1系列21008040600.050.10.20.5DMSO浓度/%1抑制率/%25200表1 滇白珠不同部位对J774巨噬细胞株增值影响分析Tab.1 AnalysisoftheeffectsofdifferentpartsofDianbaizhuontheproliferationofJ774macrophagecelllin
11、estrain/(g/mL)平均值/(个/L)存活率/%抑制率/%地下地上全株地下地上全株地下地上全株101.024 10.354 60.857 092.4280.3691.977.5819.648.03200.966 60.333 70.891 287.2275.6195.6412.7824.394.36400.590 20.098 40.497 653.2622.2953.4046.7477.7146.60Technique express科技广场64Vol.46 No.9 Sep.2023在该表数据基础上,应用SPSS软件对原始数据进行处理分析,求得滇白珠地下、地上和全株的IC50值(该
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