丁香挥发油对小鼠皮肤影响的初步研究.pdf
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1、实验研究基金项目:厦门医学院校级一流课程项目();厦门医学院教育教学改革研究项目 金课建设培育计划();福建省大学生创新创业项目();厦门医学院大学生创新创业项目(,);厦门医学院校级一流课程项目()。作者简介:蔡燕萍(),女,汉族,本科,研究方向药物分析、中药活性成分及其作用机理。:通信作者:张伟云(),女,汉族,博士,教授、硕士生导师,研究方向药物分析、中药活性成分及其作用机理。:丁香挥发油对小鼠皮肤影响的初步研究蔡燕萍,赵思烨颜伟泓林欣欣苟文韬叶明星吴艺锦张伟云 厦门医学院药学系 厦门市中药生物工程重点实验室,福建厦门 ;广州中医药大学中药学院,广东广州 【摘要】目的:为了培养学生的科学
2、素养能力,引导学生将科研课题“丁香挥发油对小鼠正常皮肤及破损皮肤的影响”设计成本科生初步研究性实验。通过考察丁香挥发油的皮肤刺激性,评价该挥发油的安全性。方法:参照 化妆品安全技术规范(版),采用急性皮肤刺激性实验和多次给药皮肤刺激实验。结果:急性皮肤刺激性实验中,实验组小鼠正常皮肤和破损皮肤的皮肤反应平均积分值都为 ;多次给药皮肤刺激实验中,实验组小鼠正常皮肤和破损皮肤的每天每只动物皮肤反应平均积分分别为 和 ,以上各组积分均小于 ,初步表明该挥发油为无刺激性。结论:广西产地的丁香挥发油对小鼠的正常皮肤和破损皮肤刺激性小,具有一定的安全性,展示了丁香一定的应用价值。该实验包含提取制备技术和急
3、性皮肤刺激性实验的原理、操作,对本科生的客观实际分析能力和解决问题能力起到正向反馈的作用,以便为学生今后进行科学研究打下初步的基础。【关键词】丁香挥发油;皮肤刺激性;小鼠;安全性【中图分类号】【文献标志码】【文章编号】():,;,:,“”(),;,:;中国民族民间医药 年 月第 卷第 期 ,丁香()为桃金娘科蒲桃属植物丁香的干燥花蕾,又称为公丁香,具有药用和食用价值,为我国重点开发药材之一 。宋代 开宝本草辑副本 、证类本草 和明代 本草品汇精要 均记载丁香生交、广南番,现 中华本草 记载产于马来西亚、东非沿岸国家及印度尼西亚,我国海南、广东也有栽培。版 药典中丁香的性味归经记载为:辛,温。归
4、脾、胃、肺、肾经,有温中降逆,补肾助阳的功效,常用于食少吐泻、呃逆呕吐、心腹冷痛等病症的治疗 。丁香的干燥花蕾中含有丰富的挥发油,主要成分包括丁香酚、石竹烯和乙酸丁香酚酯 。研究表明丁香挥发油具有抗炎 、杀虫 、抗氧化 、抑菌 、麻醉 和促进透皮吸收 的药理作用。课题组曾对中药护肤、驱蚊、抑菌洗衣液进行过开发初探,因丁香挥发油具有良好的抑菌效果,所以笔者选用丁香挥发油为这款洗衣液的配方组成之一,但发现目前关于丁香挥发油安全性的研究较少,本研究旨在考察丁香挥发油的皮肤刺激性,以评价该挥发油的安全性,为进一步开发这款中药护肤驱蚊洗衣液提供一定的参考。通过将本实验引入本科生综合性实验教学,有助于巩固
5、学生对药理学理论知识的理解,提高学生的实验实践能力。实验材料 试剂脱毛膏(广州菲诺化妆品有限公司)实验动物健康 级 小鼠共 只,雌雄各半,体重 ,杭州医学院提供,生产许可证号:(浙),合格证编号:(雌)、(雄)。(自由饮食)实验条件:温度 。药物与设备中药丁香购自北京同仁堂厦门禾祥中医门诊部,产地广西。实验所用丁香由厦门大学药学院陈全成副教授和张伟云老师鉴定为桃金娘科蒲桃属植物丁香的干燥花蕾()。电热套,邦西仪器科技上海有限公司生产;电子天平,奥豪斯仪器有限公司生产。实验方法 丁香挥发油的提取取广西丁香药材 ,分为 份,每份分别置于 圆底烧瓶中,份药材加入 倍量的蒸馏水 ,浸泡 ,采用水蒸气蒸
6、馏法加热提取丁香挥发油(沸腾前设置 ,沸腾后可降温为 ),收集丁香挥发油,转至冰箱 暂存备用。急性皮肤刺激实验(一次给药皮肤刺激实验)取 级 小鼠 只,雌雄各半,所有小鼠单笼饲养,随机分为 组,每组 只。一组为正常对照组,一组为实验组。随机分组后,对全部小鼠背部脊柱两侧脱毛,两侧脱毛范围各为 ,后进行皮肤划伤,左侧皮肤不划伤,右侧皮肤划伤为“”字形,使皮肤表面稍稍出血即可,划伤示意图如图 所示,划伤后立即涂药,空白对照组涂纯水,实验组涂丁香挥发油,给药后均用纱布覆盖,胶布固定,敷用 ,后用蒸馏水清洗涂抹部位皮肤,在清洗完涂抹部位皮肤后的 、和 时观察小鼠左右两侧涂抹部位的皮肤反应,观察小鼠涂抹
7、部位皮肤是否出现红斑、水肿等现象,按表 进行皮肤反应评分 ,以小鼠积分的平均值进行综合评价,根据 、各观察时点最高积分均值,按表 判定皮肤刺激强度 。表 皮肤刺激反应评分表皮肤反应积分红斑和焦痂形成无红斑轻微红斑(勉强可见)明显红斑中度 重度红斑严重红斑(紫红色)并有轻微焦痂形成水肿形成无水肿轻微水肿(勉强可见)轻度水肿(皮肤隆起轮廓清晰)中度水肿(皮肤隆起约 )重度水肿(皮肤隆起超过 ,范围扩大)最高积分表 皮肤刺激强度分级表积分均值强度 无刺激性 中等刺激性 轻刺激性 强刺激性中国民族民间医药 年 月第 卷第 期 ,图 小鼠脱毛划伤示意图 多次给药皮肤刺激实验小鼠的试验方法与急性皮肤刺激实
8、验相同,每天涂抹 次,连续涂抹,去除受试物再观察 。每日观察时,需用蒸馏水清洗涂抹部位皮肤,在清洗完涂抹部位皮肤的 后再进行观察,按表 进行皮肤反应评分。结果评价:按下列公式计算每天每只动物平均积分,以表 判定皮肤刺激强度 。每天每只动物平均积分 红斑和水肿积分 受试动物数 统计学分析对每天小鼠皮肤反应积分采用 统计软件进行数据处理(对照组与实验组比较),采用配对 检验的统计学方法进行分析,计量资料以均数加减标准差()表示,表示差异有统计学意义。结果与分析 急性皮肤刺激性实验(一次给药皮肤刺激实验)一次给药后,经观察,发现所有小鼠除了表现较为躁动外,未见全身中毒的现象,无死亡,各组小鼠的行为、
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