儿童肝豆状核变性的临床资料与ATP7B基因分析.pdf
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1、74(DepiChina)出生缺陷预防在线投稿网址儿童肝豆状核变性的临床资料与ATP7B基因分析刘攀,舒畅,唐丽,彭晓康,刘小乖,李瑞娜(西安交通大学附属儿童医院感染科,陕西西安7 10 0 0 3)摘要目的分析肝豆状核变性(WD)患儿的临床资料及ATP7B基因变异特点。方法收集2 0 16 年1月至2 0 2 2 年6月于西安交通大学附属儿童医院感染科就诊的158 例WD患儿的临床资料,根据受累器官及临床表现的不同,分为肝型WD(n=144)和脑型WD(n=14)。根据肝脏受累的轻重程度及病程长短、表现的差异,肝型WD又分为症状前WD(n=114)、急慢性肝炎型WD(n=30)。采用目标基因
2、捕获、高通量测序技术进行基因检测,根据是否存在c.2333GT(p.R778L)变异,分为R778L型(n=55)与其他型WD组(n=61。比较各组间患儿的一般情况、临床表现及实验室指标。结果昊症状前WD患儿的确诊年龄小于急慢性肝炎型WD与脑型WD(Z值分别为一56.6 40、一6 4.956,P0.05);急慢性肝炎型WD患儿的病程短于症状前WD患儿(Z=2 6.930,PT(等位基因频率为2 8.8 8%)、c.2621CT(等位基因频率为9.48%)、c.2310CG(等位基因频率为8.6 2%)及c.2975CT(等位基因频率为7.7 6%)。R778L组WD患儿的确诊年龄大于其他型W
3、D(Z=2.082,PT(p.R778L)genevariation,the children were divided into R778L group(n=55)and other gene variation group(n=61).The general conditions,clin-ical manifestations and laboratory results of the children were compared among the groups.Results The age of the children with thedetermined diagnosis o
4、f pre-symptomatic WD was lower than that of those children with acute or chronic hepatitis WD and neuro-logical type of WD(Z=-56.640 and-64.956 respectively,both P0.05).The course of the children with acute or chronic hep-atitis WD was shorter than that of those children with pre-symptomatic WD(Z=26
5、.930,PT(28.9%of alleles frequency),c.2621CT(9.5%of alleles frequency),c.2310CG(8.6%of alleles frequency)and c.2975CT(7.8%of alleles frequency).The age of the children who had the determined diagnosis of WDin R778L gene mutation group was older than that of the children with the determined diagnosis
6、of WD in other gene types of WDgroup(Z=2.082,P0.05).Conclusion The liver manifestations are common in the children with WD,and there is no significantcorrelation between genotype and clinical phenotype.Key words Wilsons disease(WD);ATP7B gene;children;genotype收稿日期2 0 2 2-0 8 0 9作者简介 刘攀(198 8 一,女,主治医
7、师,主要从事儿童感染性疾病及肝脏疾病的研究。通讯作者李瑞娜,副主任医师。75Jul.2023Chinese Journal of Woman and Child Health Research2023年7 月Vol.34 No.7中国妇幼健康研究第34卷第7 期肝豆状核变性(Wilsons disease,WD)是一种由ATP7B基因缺陷导致的铜代谢障碍性疾病1-2 ,是目前少数可治疗的遗传代谢性疾病之一3。WD患病率为(0.2 54.0 0)/10 0 0 0,但理论发病率远高于此4-5。ATP7B基因编码的ATP7B蛋白属于高度保守的P型三磷酸腺苷(adenosine-triphospha
8、te,ATP)酶超家族的1B类,负责将铜转运人高尔基体或毛细胆管内,在铜的排泄中起主要作用。ATP7B基因变异导致ATP7B酶活性改变,从而引起肝细胞内铜含量增加,造成肝细胞死亡和铜渗漏入血,进一步引起肝、脑、眼睛、肾脏等组织器官的损伤2.41。WD的临床表现复杂多样,可为无症状性转氨酶升高、急慢性肝炎、肝硬化、肝衰竭,也可表现为急性溶血性贫血、神经精神症状等1,3-4。本研究对近年来在西安交通大学附属儿童医院就诊的158 例WD患儿的临床特征与ATP7B基因进行总结分析,以提高临床医师对该病的认识,并进一步探讨本地区WD患儿的遗传学特征。1资料与方法1.1研究对象回顾性收集2 0 16 年1
9、月至2 0 2 2 年6 月期间收治于西安交通大学附属儿童医院感染科的158 例诊断明确且为初诊的WD患儿作为研究对象。诊断标准:根据中华医学会肝病学会分会遗传代谢性肝病协作组制定的肝豆状核变性诊疗指南(2 0 2 2 年版)4,推荐应用2 0 0 1年莱比锡第8 届WD国际会议的诊断标准即Leipzig评分系统6 ,总分4分可确诊。本研究经西安市儿童医院伦理委员会批准(批准文号:论2 0 2 2 0 0 7 3),并豁免患儿及家属知情同意。根据WD患儿的受累器官及临床表现的不同,分为肝型WD组和脑型WD组,分别有144例、14例。根据肝脏受累的轻重程度及病程长短、表现的差异,肝型WD组又分为
10、症状前WD、急慢性肝炎型WD,分别有114例和30 例。1.2资料收集通过我院电子病历系统,回顾性收集研究对象初诊时的临床表现、辅助检查,包括血尿常规、肝功、铜蓝蛋白(ceruloplasmin,CER)、2 4h 尿铜、血清铜、凝血功能、腹部超声及头颅影像学、基因检测和眼科角膜K-F环等结果。1.3 ATP7B 基因检测经患儿监护人签署书面知情同意书后,采集患儿及父母静脉血3mL,提取基因组DNA,并构建与代谢性肝病相关目标基因(ABCB4、A T P7 B、CCDC115、NBA S、T M EM 199等共57 3个基因)的全基因组文库。利用液相捕获试剂盒捕获目标基因后进行高通量测序,通
11、过生物信息学分析找出相关基因的变异信息。当疑似有外显子缺失、临床高度怀疑WD但未检测出变异基因或仅检测到1个变异时,行多重连接依赖探针扩增或全外显子测序进一步分析。根据获得的变异结果对患儿及其父母进行Sanger测序验证。采用生物信息分析软件Poly-Phen-2(http:/genetics.bwh.harvard.edu/pph2)、SIFT(h t t p:/s i f t.j c v i.o r g)及MutationTaster(http:/m u t a t i o n t a s t e r.o r g)对新变异基因进行致病性预测。依据美国医学遗传学及基因组学学会(Ame-ric
12、an College of Medical Genetics and Ge-nomics,ACMG)的遗传变异分类标准与指南7-8 ,将变异基因归类为致病的、可能致病的、意义不明确的、可能良性的或良性的变异。1.4统计学方法采用SPSS25.0进行数据统计与分析,对计量资料进行正态性检验,符合正态分布者以均值土标准差(x土s)表示,非正态分布的以中位数及四分位数M(Q i,Q 4)表示,采用Mann-WhitneyU检验或Kruskal-WallisH检验比较组间的差异。计数资料以例数(n)或百分率(%)表示,组间比较采用检验或Fisher精确检验法。P0.05),症状前WD患儿的确诊年龄明显
13、小于急慢性肝炎型WD与脑型WD(Z值分别为一56.6 40、一6 4.956,P0.05),急慢性肝炎型WD患儿的病程短于症状前WD患儿(Z=26.930,P0.05),见表1。表1肝型WD组与脑型WD组患儿的一般情况与临床表现比较n(%),M(Q 1,Q 4),x 土sTable 1(Comparison of general information and clinical manifestations of the children between hepatic type of WDgroup and neurological type of WD group n(%),M(Qi,Q4
14、),x s一般情况肝型WD组(n=144)脑型WD组(n=14)x?/HP与临床表现症状前WD(n=114)急慢性肝型炎WD(n=30)男性66(57.89)16(53.33)7(50.00)0.4510.798确诊年龄(岁)5.30(3.57,6.81)a.b10.433.3511.002.4157.6410.001病程(月)1.00(0.67,6.00)a0.37(0.23,1.00)2.00(0.59,3.50)9.8810.007K-F环阳性5(5.10)24(82.76)13(100.00)97.7010.001转氨酶升高110(96.49)30(100.00)2(14.29)54.
15、0430.001黄疽028(93.33)2(14.29)134.7200.001腹胀或腹痛024(80.00)097.8750.001肝脏肿大36(31.58)21(70.00)023.8720.001脾脏肿大4(3.51)20(66.67)1(7.14)56.6130.001腹腔积液021(70.00)1(7.14)79.3680.001肝硬化021(70.00)1(7.14)79.3680.001溶血性贫血018(60.00)066.0960.001神经精神症状02(6.67)14(100.00)82.3410.001注:a与急慢性肝炎型WD比较,P0.05;b 与脑型WD比较,P0.05
16、。2.2临床表现以肝脏为首发表现的患儿(肝型WD组)有144例,占91.14%,其中无症状患儿114例,占72.15%,仅表现为铜代谢指标异常者有4例,转氨酶升高者110 例;查体发现肝脏肿大者36 例,其中4例伴脾脏肿大。98 例患儿行眼科检查,其中5例存在角膜K-F环。以急性慢性肝炎表现者30 例,均有转氨酶升高,其中2 8 例出现不同程度的黄疽(2 7例为胆汁淤积,1例人院时为高胆红素血症、住院第2天复查转为胆汁淤积),2 4例存在腹胀或腹痛,2 1例存在腹腔积液,2 1例出现肝脏肿大、肝硬化,2 0 例伴有脾脏肿大,2 1例出现急性肝衰竭,其中18 例伴有Coombs阴性溶血性贫血。2
17、 9例患儿行眼科检查,其中2 4例存在角膜K-F环。见表1。以神经精神症状为主要表现的WD(脑型WD)患儿有14例,10 例有吐字不清、流涎,8 例有肢体抖动、震颤,4例有肌张力增高,3例有步态异常,3例有吞咽、咀嚼障碍,3例有情绪低落、表情淡漠,2 例有轻度黄疽,2 例有转氨酶轻至中度升高。13例患儿行眼科检查,均存在角膜K-F环。症状前WD、急慢性肝炎型WD与脑型WD患儿在是否存在K-F环、转氨酶升高、黄疽、腹胀或腹痛、肝脏肿大、脾脏肿大、腹腔积液、肝硬化、溶血性贫血及神经精神症状方面差异均有统计学意义(P0.05),见表1。2.3实验室检查158例WD患儿的CER值为0.0 3(0.0
18、1,0.0 6)g/L,2 4h 尿铜为17 7.0 0(115.0 0,2 8 9.6 0)g/24h,血清铜为9.8 7(7.36,13.19)mol/L。症状前WD、急慢性肝炎型WD、脑型WD患儿的总胆红素(totalbilirubin,T B)、直接胆红素(direct bilirubin,DB)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,A LT)、尿铜、血小板(platelet,PLT)差异均有统计学意义(H 值分别为7 0.150、6 8.443、6 0.50 4、39.50 2、51.343,P0.05),见表2。进一步两两比较发现:症状前WD患儿的血
19、清铜水平较急慢性肝炎型WD患儿低(Z=一2 7.313,P0.05),2 4h 尿铜较急慢性肝炎型WD、脑型WD患儿低(Z值分别为一54.92 9、77Jul.22023Chinese Journal of Woman and Child HealthResearch2023年7 月Vol.34No.7中国妇幼健康研究第34卷第7 期一33.0 0 5,P0.05)。脑型WD患儿的天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,A ST)、白细胞(whiteblood cell,WBC)较症状前WD与急慢性肝炎型WD患儿低(AST:Z值分别为51.2 34、52.0
20、13;WBC:Z值分别为39.0 33、38.98 1,P0.05)。急慢性肝炎型WD患儿的血清白蛋白(albumin,A l b)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,A LP)、红细胞计数(redblood cells,RBC)、血红蛋白(hemoglobin,Hb)较症状前WD、脑型WD患儿低(AIb:Z值分别为6 9.7 10、一40.2 50;ALP:Z值分别为54.0 6 7、34.6 7 3;RBC:Z值分别为6 4.7 34、一52.92 3;Hb:Z值分别为62.763、一6 4.0 0 0,P0.05);CER 水平、-谷氨酰转肽酶(-glutamyl t
21、ranspeptidase,G G T)、较症状前WD、脑型WD患儿高(CER:Z值分别为一32.2 57、36.000;G G T:Z值分别为一32.57 1、54.154,P0.05)。表2肝型WD与脑型WD组患儿的实验室检查比较M(QI,Q),x 土Table 2 Comparison of laboratory results of the children between hepatic type of WD groupand neurological type of WD group M(Qi,Q),x s肝型WD组(n=144)实验室指标脑型 WD组(n=14)HP症状前(n=1
22、14)急慢性肝炎型(n=30)CER(g/L)0.02(0.01,0.05)a0.060.05b0.02(0.01,0.04)12.8750.002尿铜(g/24h)148.50(106.40,207.00)a.b628.80(312.20,1394.30)415.30(147.70,880.00)39.5020.001血铜(mol/L)9.07(7.27,11.84)a13.034.6711.474.299.8740.007TB(mol/L)10.00(7.50,12.70)a,b113.90(47.70,332.00)19.30(17.00,22.50)70.1500.001DB(umol
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