分散固相萃取-超高效液相色谱-四极杆_飞行时间质谱法测定禽肉中松香酸类物质.pdf
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1、基金项目:广州市市场监督管理局科技项目(编号:k j );广州检 验 检 测 认 证 集 团 有 限 公 司 科 技 项 目(编 号:k j G Z)作者简介:林晓君(),女,广州检验检测认证集团有限公司助理工程师.E m a i l:q q c o m收稿日期:改回日期:D O I:/j s p j x 文章编号 ()分散固相萃取超高效液相色谱四极杆/飞行时间质谱法测定禽肉中松香酸类物质D e t e r m i n a t i o no f a b i e t i ca c i dc o m p o u n d s i np o u l t r yb yu l t r ap e r f o
2、 r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y q u a d r u p o l e t i m e o f f l i g h tm a s ss p e c t r o m e t r yc o u p l e dw i t hd i s p e r s i v es o l i dp h a s ee x t r a c t i o n林晓君L I N X i a o j u n严婉盈Y AN W a n y i n g何敏恒HE M i n h e n g黄嘉乐HU ANGJ i a l e伍依琪WUY i q i叶玲Y EL i
3、 n g张瑞瑞ZHANGR u i r u i(广州检验检测认证集团有限公司国家加工食品质量监督检验中心 广东,广东 广州 )(G u a n g z h o uI n s p e c t i o na n dT e s t i n gC e r t i f i c a t i o nG r o u pC o,L t d,N a t i o n a lQ u a l i t yT e s t i n gC e n t e rf o rP r o c e s s e dF o o dG u a n g d o n g,G u a n g z h o u,G u a n g d o n g ,C
4、h i n a)摘要:目的:建立超高效液相色谱四极杆/飞行时间质谱法(U P L C Q TO F/M S)测定禽肉中松香酸类物质.方法:样品使用乙腈提取,盐析分层后,上清液由C 固相萃取剂净化,U P L C Q TO F/M S电喷雾负离子模式测定.结果:种松香酸类物质在 g/L质量浓度范围内线性关系良好,相关 系数R ,平 均回 收 率为 ,相对标准偏差(R S D s)为 (n);方法检 出 限(L O D s)为 g/k g,方法 定 量限(L OQ s)为 g/k g.结论:试验方法操作简便,快捷,回收率和灵敏度高,精密度好,能够满足禽肉中种松香酸类物质的检测需求.关键词:分散固相
5、萃取;超高效液相色谱四极杆/飞行时间质谱;禽肉;松香酸A b s t r a c t:O b j e c t i v e:A nu l t r ap e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y q u a d r u p o l e/t i m e o f f l i g h tm a s s s p e c t r o m e t r y(U P L C Q T O F/M S)m e t h o dw a s e s t a b l i s h e d f o r t h ed e t e r m i n a t i
6、o no fa b i e t i ca c i d s i np o u l t r y M e t h o d s:T h es a m p l e sw e r ee x t r a c t e dw i t ha c e t o n i t r i l e,t h e ns a l t e do u ta n ds t r a t i f i e d T h es u p e r n a t a n tw a sp u r i f i e db yC s o l i dp h a s ee x t r a c t a n ta n df i n a l l yd e t e r m i
7、 n e db yU P L C Q T O F/M Si nE S In e g a t i v em o d e R e s u l t s:A b i e t i c a c i d c o m p o u n d s e x h i b i t e d a g o o d l i n e a rr e l a t i o n s h i pi nt h ec o n c e n t r a t i o nr a n g eo f g/L w i t hg o o dc o r r e l a t i o nc o e f f i c i e n tR T h ea v e r a g
8、e r e c o v e r i e so ft h r e ea b i e t i ca c i dc o m p o u n d s w e r ee x p e r i m e n t s,t h ea v e r a g er e c o v e r yr a t e w a s w i t h r e l a t i v e s t a n d a r dd e v i a t i o n s(R S D s,n)o f ,a t t h es p i k e dl e v e lo f,g/k g T h el i m i t so fd e t e c t i o n(L O
9、 D s)w e r e g/k ga n dt h em e t h o dl i m i t so fq u a n t i f i c a t i o n(L OQ s)w e r e g/k g C o n c l u s i o n:T h i sm e t h o d w a sc o n v e n i e n to p e r a t i o n,r a p i d,h i g hr e c o v e r ya n ds e n s i t i v i t ya n dg o o dp r e c i s i o nt h a t c o u l dm e e tt h ed
10、 e t e r m i n a t i o nr e q u i r e m e n t so ft h r e ea b i e t i ca c i d si np o u l t r y K e y w o r d s:d i s p e r s i v e s o l i dp h a s e e x t r a c t i o n;U P L C Q T O F/M S;p o u l t r y;a b i e t i ca c i d松香是一种天然树脂,由松树的含油树脂加工制得,通过进一步分离纯化可以得到松香酸类化合物,主要为松香酸、脱氢松香酸和海松酸,被应用于药品、包装材料、
11、油墨和涂料等工业领域.同时,松香酸也可以被应用于皮肤病治疗中,对治疗不同类型的银屑病有一定的成效.松香还具有较好的黏附性,可用于畜禽脱毛,但畜禽表皮和肌肉中可能残留.有研究显示,松香酸能抑制水蚤和虹鳟鱼等生物的生长发育,对人体肺泡细胞、上皮细胞、成纤维细胞、红细胞和多核白细胞具有毒性作用.G B 规定,松香酸甘油酯可作为添加剂使用,但松香不允许使用,因此建立对松香酸类物质的F OO D&MA CH I N E R Y第 卷第 期 总第 期|年 月|相关检测方法,对保障消费者的健康安全尤其重要.目前,有关禽肉中违法添加物的检测方法主要集中于液相色谱法、气相色谱法、液相色谱串联质谱法 、气相色谱质
12、谱法 和酶联免疫法 等.其中色谱法选择性低,检出限高,对于基质复杂的样品,分离难度大,容易影响分析结果;酶联免疫法灵敏度高、且有较强的特异性 ,但操作过程繁琐,对于多组分化合物的检测存在一定的局限性;质谱法具有高通量、选择性高、灵敏度高的特点.研究拟以分散固相萃取技术为基础,建立高分辨四极杆/飞行时间质谱法测定禽肉中的松香酸类物质,利用基质曲线校正结果,准确定性定量,以期为 禽 肉 中 违 法 添 加 物 的 分 析 筛 查 技 术 研 究 提 供依据.材料与方法材料与试剂禽肉:市售;松香酸、脱氢松香酸、海松酸标准品:纯度,上海安谱实验科技股份有限公司;氨水、甲 酸 铵、甲 酸、乙 腈、乙 酸
13、 乙 酯、甲 醇:HP L C级,美国赛默飞公司;十八烷基键合硅胶(C)、N丙基乙二胺(P S A)、石墨化碳黑(G C B)、氨丙基键合硅胶(NH)固相萃取剂、中性氧化铝(C NW)、氯化钠、无水硫酸镁:分析纯,上海安谱实验科技股份有限公司.仪器与设备高分辨质量飞行时间质谱仪:A P I 型,美国A BS C I E X公司;液相色谱系统:L C A D型,日本岛津公司;超纯水系统:M i l l i QA d v a n t a g eA 型,法国默克密理博公司;高速离心机:k 型,德国西格玛公司;多管漩涡振荡器:M u l t iR e a x型,德国海道夫公司;色 谱 柱:X b r
14、i d g eB EH C(mm mm,m),沃特世科技(上海)有限公司.试验方法标准溶液的配制准确称取松香酸、脱氢松香酸和海松酸标准品,用乙腈溶解并定容,单标储备液质量浓度为 m g/L,混合标准液质量浓度为 m g/L.用空白基质液稀释成各级质量浓度为,g/L的标准曲线.前处理条件优化称取g搅碎后的样品,分别加入 m L水和 m L乙腈,涡旋振荡 s,分别加入无水硫酸镁g和氯化钠g,涡旋震荡 m i n,于高速离心机中以 r/m i n的速度离心 m i n.移取m L上层乙腈相于m L离心管中,分别加入 m gC 固相萃取剂,涡旋振摇m i n,再以 r/m i n速度离心m i n,取
15、上清液过 m有机滤膜,待测.检测条件()色谱条件:流动相A相为乙腈,B相为氨水,流速m L/m i n;进样体积 L;柱温 ;梯度洗脱程序:m i n,A;m i n,A;m i n,A;m i n,A;m i n,A.()质谱条件:采用电喷雾电离(电离源)和大气压化学电离(校正源)复合源测定,负离子模式;一级(T O F)扫描质量 范 围 D a;二 级 扫 描 质 量 范 围 D a;校正液流速m L/m i n;气帘气 k P a;雾化气 k P a;加热 辅 助气 k P a;脱溶 剂 气温 度 ;离子源喷射电压 V;去簇电压 V;碰撞能量()e V;T O F I D A M S监测
16、模式;每 个样品进行一次自动校正,以确保系统在批内的精准质量数稳定.基质效应对试验所选样品进行批量测定,选择空白样品,处理后制得基质液,分别用空白基质液和乙腈配制等浓度标准溶液,以丰度比例为评判依据,考察基质效应.加标回收试验通过低浓度加标,以 倍信噪比为基准,测得方法的定量限.向阴性样品中加入混合标准溶液,使样品质量分数为定量限的,倍,做组平行试验,进行测定后,统计结果,计算回收率和相对标准偏差.结果与讨论色谱条件优化负模式条件下,流动相使用乙腈氨水、乙腈水、乙腈mm o l/L甲酸铵和乙腈甲酸种不同的体系,考察松香酸、脱氢松香酸和海松酸种化合物的母离子丰度.结果发现,乙腈氨水作为流动相时,
17、种化合物的母离子丰度最高,是其他种流动相的倍以上,这是由于海松酸、松香酸和脱氢松香酸均含有羧基结构,因此在离子化过程中,容易失去质子,形成稳定的MH负离子.负模式下乙腈氨水体系所得的丰度仍为正模式下的倍左右.因此,最终选择乙腈氨水体系为流动相,负模式条件下测定,通过调节梯度洗脱程序,使同分异构体松香酸和海松酸达到基线分离(见图).质谱条件及参数E S I负模式下,扫描海松酸、松香酸和脱氢松香酸的一级 母 离 子 M H,获 得m/z 和m/z (松香酸、海松酸互为同分异构体).调节去簇电压(D P)和碰撞电压(C E)优化母离子及二级碎片离子安全与检测S A F E T Y&I N S P E
18、 C T I ON总第 期|年 月|图种目标物的提取离子流色谱图F i g u r eE x t r a c t i o n i o nc h r o m a t o g r a mo f t h r e ec o m p o u n d s的丰度以达到最佳.由于离子的精确质量分数即可用于定性,因此使用母离子定性定量,丰度较高的二级碎片辅助参考定性.具体质谱参数见表.表脱氢松香酸、松香酸和海松酸的质谱参数T a b l eM a s s s p e c t r o m e t r yp a r a m e t e r so fd e h y d r o a b i e t i ca c i d
19、,a b i e t i c a c i da n dp i m a r i c a c i d化合物母离子理论值(m/z)母离子实测值(m/z)主要二级碎片(m/z)误差()脱氢松香酸 松香酸 海松酸 提取溶剂的选择试验初期对比了甲醇、乙腈和乙酸乙酯的提取效果,以 g/L的加标水平的回收率为判定依据.由图可知,甲醇对脱氢松香酸、松香酸和海松酸种化合物的提取率较低,只有 左右,可能是由于甲醇与水混溶后,在加入盐的情况下未析出,导致提取液杂质较多,且基质效应严重,而乙酸乙酯回收率与甲醇的相当,可能是由于乙酸乙酯极性较低,目标化合物具有羧基结构,可与水形成氢键,因此与乙酸乙酯具有一定的极性差异,导
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