分光光度法测定猪凝血酶稀释剂中氨丁三醇含量.pdf
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1、66上海医药 2023年 第44卷 第21期(11月上)药物研发分光光度法测定猪凝血酶稀释剂中氨丁三醇含量余双英1,2 刘璐2 张军东1(1.上海昊海生物科技股份有限公司 上海 201613;2.上海利康瑞生物工程有限公司 上海 201707)摘 要 目的:建立一种猪凝血酶稀释剂中氨丁三醇含量测定方法,并进行方法学验证。方法:采用紫外-可见分光光度法在 620 nm 波长处测定吸光度,建立回归方程,计算氨丁三醇的含量。结果:该方法专属性较强,标准曲线的线性范围在 0.579 31.737 9 mg/mL;低、中、高 3 个浓度水平的总平均回收率为 98.72%(n=9),RSD 为 1.46%
2、(n=9);精密度和中间精密度的总平均值为 1.140 5 mg/mL(n=12),RSD 为 3.59%(n=12);3 批样品的氨丁三醇含量均符合要求。结论:该方法准确度、精密度、稳定性、耐用性良好,可用于猪凝血酶稀释剂中氨丁三醇含量测定。关键词 分光光度法 猪凝血酶稀释剂 氨丁三醇中图分类号:R927.11;R937.1 文献标志码:A 文章编号:1006-1533(2023)21-0066-04引用本文 余双英,刘璐,张军东.分光光度法测定猪凝血酶稀释剂中氨丁三醇含量 J.上海医药,2023,44(21):66-69.Determination of trometamol in por
3、cine thrombin diluent by spectrophotometryYU Shuangying1,2,LIU Lu2,ZHANG Jundong1(1.Shanghai Haohai Biological Technology Co.,Ltd.,Shanghai 201613,China;2.Shanghai Likangrui Biological Engineering Co.,Ltd.,Shanghai 201707,China)ABSTRACT Objective:A method by spectrophotometry was established to dete
4、rmine the trometamol in porcine thrombin diluent and methodological validation was performed.Methods:The absorbance was determined at the wavelength of 620 nm by UV-Vis spectrophotometry.The regression equation was established to calculate the content of tromethamine.Results:The method had strong sp
5、ecificity and the standard curve was linear over the range of 0.579 3-1.737 9 mg/mL.The overall average recovery at low,medium and high levels was 98.72%(n=9)with the overall RSD value 1.46%(n=9).The overall mean value of precision and mid-precision was 1.140 5 mg/mL(n=12)with RSD 3.59%(n=12).The co
6、ntent of trometamol in three batches of samples met the requirements.Conclusion:This method was suitable for the determination of trometamol in porcine thrombin diluent with good accuracy,reproducibility,stability and ruggedness.KEY WORDS spectrophotometry;porcine thrombin diluent;trometamol猪源纤维蛋白黏合
7、剂在临床常用于手术中辅助止血,该产品生物相容性好、无毒无刺激,能有效黏附于创口起到良好的止血和促进创口愈合的作用1-3。猪源纤维蛋白黏合剂主要是由猪纤维蛋白原、猪凝血酶及相应的稀释剂组成的一种复合制剂,氨丁三醇作为猪凝血酶稀释剂的一种重要辅料,根据相关要求需控制其含量。因此,建立一种适合本产品中氨丁三醇含量的测定方法尤为重要。国家药品标准 标准号:WS-10001-(HD-0467)-2002氨丁三醇注射液4和中华人民共和国药典2020 年版四部药用辅料氨丁三醇中的含量测定均采用滴定法:以甲基红做指示剂,用盐酸滴定液(0.1 mol/L)滴定。但是在猪凝血酶稀释剂制备过程中添加了稀盐酸调节产品
8、的 pH,盐酸会对最终滴定结果有干扰,故排除滴定法。氨丁三醇属带邻位的多羟基醇,相对分子质量较小,且没有紫外吸收,但能够在强碱条件下与氢氧化铜发生络合反应,生成深蓝色的氨丁三醇铜溶液,利用紫外-可见分光光度法测定络合物的吸光度,从而计算出氨丁三醇的含量。已有文献5-6采用紫外-可见分光光度法测定不同产品中氨丁三醇的含量,但本品中除氨丁三醇外还有其他一些对测定产生干扰的组分,不适合用于本品中氨丁三醇的测定。因此,本研究针对公司产品特点,作者简介:余双英,硕士,工程师。主要从事药品研发工作 67上海医药 2023年 第44卷 第21期(11月上)药物研发对测定方法中采用的波长、硫酸铜及氢氧化钠溶液
9、的浓度或用量、离心转速等条件均进行了改进,最终建立的方法操作简单,结果准确,并经过了方法学验证。1 材料与方法1.1 样品与试剂猪凝血酶稀释剂(公司自产);氨丁三醇对照品(中国食品药品检定研究院);硫酸铜、氢氧化钠、盐酸(分析纯级,上海凌峰化学试剂有限公司);氯化钙(药用级,广东省台山市新宁制药有限公司)。1.2 仪器与设备紫 外-可 见 分 光 光 度 计(Cary 60,Aglient Technologies);ME104 和 ME1002 分 析 天 平、S220 pH计 梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司);H1650 台式高速离心机(湖南湘仪实验室仪器开发有限公司)。1.3 溶液配
10、制1)氢氧化铜悬浊液 在 10 mL 离心管中分别依次加入 5%氢氧化钠溶液 3.5 mL 和 15%硫酸铜溶液 0.3 mL,立即振荡混匀,即得氢氧化铜悬浊液(需现配现用)。2)对照品储备液(24 mg/mL)精密称取对照品氨丁三醇 0.6 g 于 25 mL 容量瓶中,加水溶解后,稀释至刻度,摇匀,作为对照品储备液。3)线性溶液 分别精密量取 0.25、0.40、0.50、0.60、0.75 mL 对照品储备液于 10 mL 容量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,即得一系列质量浓度分别为 0.60、0.96、1.20、1.44、1.80 mg/mL 的线性溶液。4)供试品储备液(24 mg/mL
11、)精密称取氨丁三醇0.6 g,置于 25 mL 容量瓶中,加少量与凝血酶稀释剂中相同浓度的氯化钙溶液(45 mmol/L)溶解后,然后用氯化钙溶液稀释至刻度,摇匀,作为供试品样品储备液。1.4 检测波长制备 4 组氢氧化铜悬浊液,各组中分别加入 3 mL空白溶液(纯化水)、3 mL 空白基质(不含氨丁三醇的凝血酶稀释剂)、3 mL 对照品溶液(1.20 mg/mL)和 3 mL 供试品溶液,立即振荡混匀,于 10 000 r/min 离心 5 min,取上清液再次于 10 000 r/min 离心 5 min,然后取上清液于 400 800 nm 波长下进行全波段扫描,确定检测波长。1.5 回
12、归方程取 5 份氢氧化铜悬浊液,分别加入上述不同质量浓度的线性溶液 3 mL,立即振荡混匀,于 10 000 r/min 离心 5 min,取上清液重复离心一次,然后取上清液在 620 nm 波长下测吸光度,并以纯化水为空白对照。以吸光度对氨丁三醇浓度作线性回归,求得回归方程。2 结果2.1 检测波长的选择对照品和样品溶液在 620 nm 处具有最大吸收,而空白溶液和空白基质在该波长下基本没有紫外吸收(图1),表明此波长下测定的专属性较好,故选择 620 nm 为测定波长。图1 全波段扫描图2.2 线性回归方程经计算得线性回归方程为 y=0.100 6x+0.011 9,相关系数 r=0.99
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