手术室应急预案.doc
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1、入普通冰箱,等待观察检查。7将感染病毒的鸡胚自冰箱中取出,用碘酒消毒人工气室面,然后用镊子撕去胶布并将卵壳的三角形窗口扩大,以便剪取绒毛膜,此时在明亮处可清楚地看到牛痘斑,呈白色点状,有时融合成一堆或一片。8左手用小镊子镊起绒毛尿囊膜,右手用小剪顺卵壳四周剪下绒毛尿囊膜放入无菌培养皿内,并用无菌生理盐水洗涤12次,再将膜张开,膜上牛痘斑就看得更为清楚。绒毛尿囊膜上接种法,除适用于天花,牛痘等病毒外,尚适用于单纯疱疹病毒和其它一些病毒,但其它一些病毒不如天花、牛痘、单疱疹病毒那样具有明显的病斑。绒毛尿囊膜羊水卵白卵黄囊尿囊液图10-2 鸡胚绒毛尿囊膜上接种(三)羊膜腔接种法(录像)【材料】副流感
2、病毒103稀释液、910日龄鸡胚、灭菌液体石蜡、其余同尿囊腔接种法。【方法】1所用鸡胚在使用前一天,将鸡胚直立卵盘培养,使其胚胎向上,便于操作。 2接种前检查鸡胚生活情况,并用铅笔画出天然气室和胚胎的位置,然后用磨蛋器沿天然气室的边缘和胚胎位置近处,锯一方形小窗(每边约1厘米许,如图10-3)。3用小镊子挑去方形卵壳和撕去卵膜,再用无菌吸管,吸取石蜡油少许,滴入2滴,石蜡油在气室面的卵膜上很快散开,使膜透明,这样在鸡蛋照明灯或检蛋灯上,可清楚地观察到整个鸡胚。4用无菌1毫升注射器抽取少许流感病毒液体,将鸡蛋直立于照明灯或检蛋灯上,针头自窗口对着鸡胚直下,穿过绒毛尿囊膜,羊膜腔、推动注射器,注入
3、0.10.2毫升,针头刺入时注意勿伤及鸡胚本身,最好从小鸡的颈部空隙中插入。5注射完毕后,用胶布封口(胶布先经碘酒消毒和通过火焰烧去余碘处理)。用过的注射器煮沸消毒处理。鸡胚放入3537培养4872小时。6自注射后次日起逐日检查鸡胚的生活情况,2日以内死亡者多为非特异性损伤而致死;2日后死亡者视为特异性死亡,流感或副流感病毒103稀释注射时,一般不引起死亡。收获病毒之前将鸡胚移入普通冰箱1824小时,将鸡胚冻死,以减少收获时的出血。7冰箱取出鸡胚,碘酒消毒鸡蛋气室端,撕去胶布并将蛋壳窗口扩大,用小镊子撕破卵膜及绒毛尿囊膜,然后用毛细管吸出尿囊液弃去,尿囊液吸完后,左手持镊子镊住羊膜腔,右手以毛
4、细吸管插入羊膜腔吸取羊水,一般羊水可吸出一毫升左右。8滴定羊水的病毒血凝效价。羊膜腔接种方法适用于一些呼吸道病毒,如流感病毒、副流感病毒及流行性腮腺炎病毒等的分离。 卵黄囊气室卵白羊水尿囊液图 10-3羊膜腔接种法四、病毒细胞培养法及病变观察(录像)细胞培养法是目前培养病毒应用最广的一种培养方法,其优点是(1)经济适用,结果正确且敏感;(2)较实验动物易于控制。细胞培养法多应用于病毒的分离培养,进行血清中和试验及制造疫苗和抗原等方面。很多组织细胞,包括鸡胚、鼠胚、各种动物的肾组织细胞,人胚羊膜组织细胞或流产胎儿组织细胞(应在死后6小时内采取,因时间过长,组织细胞生长成功率下降)等均可作细胞培养
5、的来源。细胞的选择主要依据组织细胞对病毒的敏感性。能引起病变的组织细胞,往往取自病毒的自然宿主,特别是引起疾病的宿主的某些脏器组织细胞。人类病毒,用人或猴的组织细胞较敏感,但这不是绝对的,如地鼠肾细胞较人肾细胞对流行性乙型脑炎病毒敏感。(一) 原代细胞培养法【材料】910日龄鸡胚、Hanks氏溶液、0.25胰酶溶液、无菌小剪、镊子、无菌培养皿、毛细吸管、吸管、沉淀管、无菌细胞培养管(抗生素空瓶)、100毫升无菌玻璃瓶或三角烧瓶、备有四层纱布的玻璃漏斗。【方法】1用碘酒消毒鸡胚蛋气室外壳,并将它直立于蛋架上,以镊子将鸡胚取出放入无菌培养皿内,去头爪及内脏。2用小剪在培养皿内将胚胎剪成小块(45毫
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