灯盏花素通过抑制TLR4_NF-κB通路减轻后循环缺血性眩晕大鼠脑组织损伤.pdf
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1、论著灯盏花素通过抑制T L R 4/N F-B通路减轻后循环缺血性眩晕大鼠脑组织损伤*刘巧丽 刘晓豆 耿永芝 李勇(承德市中心医院,河北 承德 0 6 7 0 0 0)【摘要】目的 探讨灯盏花素(B r e)对后循环缺血性眩晕(P C I V)大鼠脑组织损伤的影响及其机制。方法 将8 0只W i s t a r大鼠随机分为假手术(S h a m)组、模型(P C I V)组、B r e组(2 m g/k g)、T AK 2 4 2 T o l l样受体4(T L R 4)抑制剂 组(3 m g/k g)和B r e+TAK 2 4 2组(2 m g/k g+3 m g/k g),每组1 6只。
2、采用结扎右侧颈总动脉和右侧锁骨下动脉的方法复制P C I V大鼠模型,各组分别1次/d腹腔注射(i p)给药治疗7 d。测定逃避电刺激潜伏期、前庭神经核血流量和血液流变学指标,通过HE染色和TUN E L染色观察海马神经元病理改变和神经元凋亡,比色法检测海马组织乳酸(L a c)、乳酸脱氢酶(L DH)和炎症因子(I L-1、TN F-、I F N-)含量,W e s t e r n b l o t法检测T L R 4、核因子 B p 6 5(N F-B p 6 5)、磷酸化N F-B p 6 5(p-N F-B p 6 5)、I B、p-I B 蛋白表达。结果 与P C I V组相比,B r
3、 e组和T AK 2 4 2组逃避电刺激潜伏期缩短、前庭神经核血流量升高(P0.0 5);全血(低切、中切、高切)黏度、血浆黏度、红细胞压积(HC T)、红细胞聚集指数(E A I)、血沉(E S R)降低且红细胞变形指数(E D I)升高(均P0.0 5);海马神经元数量减少、排列疏松紊乱、胞核固缩偏移深染、边界不清等病理改变明显改善,神经元凋亡数量明显减少(均P0.0 5);海马组织L a c、L DH、I L-1、TN F-、I F N-含量降低,T L R 4表达量及N F-B p 6 5、I B 磷酸化率(p-N F-B p 6 5/N F-B p 6 5、p-I B/I B)降低(
4、均P0.0 5)。B r e+TAK 2 4 2组对上述指标的作用明显优于B r e组和T AK 2 4 2组(P0.0 5)。结论 B r e可减轻P C I V大鼠眩晕症状,改善前庭神经核血流量,减轻脑组织损伤,作用机制可能与抑制T L R 4/N F-B信号通路介导炎症反应有关。【关键词】灯盏花素;缺血性眩晕;前庭神经核血流量;血液流变学;T L R 4/N F-B通路;炎症反应【中图分类号】R 2 8 5.5 【文献标志码】A D O I:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 6 7 2-3 5 1 1.2 0 2 3.1 0.0 0 8 基金项目:河北省医学科学研究课题(2
5、 0 2 0 1 2 8 2)引用本文:刘巧丽,刘晓豆,耿永芝,等.灯盏花素通过抑制T L R 4/N F-B通路减轻后循环缺血性眩晕大鼠脑组织损伤J.西部医学,2 0 2 3,3 5(1 0):1 4 5 2-1 4 5 8.D O I:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 6 7 2-3 5 1 1.2 0 2 3.1 0.0 0 8B r e v i s c a p i n e a l l e v i a t e s b r a i n t i s s u e d a m a g e i n r a t s w i t h p o s t e r i o r c i r c u
6、 l a t i o n i s c h e m i c v e r t i g o b y i n h i b i t i n g T L R 4/N F-B p a t h w a yL I U Q i a o l i,L I U X i a o d o u,G E N G Y o n g z h i,L i Y o n g(C h e n g d e C e n t r a l H o s p i t a l,C h e n g d e 0 6 7 0 0 0,H e b e i,C h i n a)【A b s t r a c t】O b j e c t i v e T o i n v
7、 e s t i g a t e t h e e f f e c t a n d m e c h a n i s m o f B r e v i s c a p i n e(B r e)o n p o s t e r i o r c i r c u l a t i o n i s c h e-m i c v e r t i g o(P C I V).M e t h o d s 8 0 W i s t a r r a t s w e r e r a n d o m l y d i v i d e d i n t o s h a m g r o u p,m o d e l g r o u p,B
8、r e g r o u p(2 m g/k g),T AK 2 4 2 t o l l-l i k e r e c e p t o r 4(T L R 4)i n h i b i t o r g r o u p(3 m g/k g)a n d B r e+T AK 2 4 2 g r o u p(2 m g/k g+3 m g/k g),n=1 6.T h e P C I V r a t m o d e l s w e r e e s t a b l i s h e d b y l i g a t i n g t h e r i g h t c o mm o n c a r o t i d a
9、 r t e r y a n d r i g h t s u b c l a v i a n a r t e r y,a n d t h e d r u g s w e r e g i v e n b y i n t r a p e r i t o n e a l i n j e c t i o n(i p)o n c e a d a y f o r 7 d a y s.T h e l a t e n c y t o e s c a p e f r o m e l e c t r i c a l s t i m u l a t i o n,b l o o d f l o w o f v e s
10、 t i b u l a r n e r v e n u c l e u s a n d h e m o r h e o l o g i c a l i n d e x e s w e r e m e a s u r e d;t h e p a t h o l o g i c a l c h a n g e s a n d a p o p t o s i s o f h i p p o c a m p a l n e u r o n s w e r e o b s e r v e d b y HE s t a i n i n g a n d TUN E L s t a i n i n g;t
11、h e c o n t e n t o f l a c t a t e(L a c),l a c t a t e d e h y d r o g e n a t i o n(L DH)a n d i n f l a mm a t o r y f a c t o r s(I L-1,T N F-,I F N-)i n h i p p o c a m p u s w e r e d e t e c t e d b y c o l-o r i m e t r y;t h e p r o t e i n e x p r e s s i o n o f T L R 4,n u c l e a r f a
12、 c t o r B p 6 5(N F-B p 6 5),p h o s p h o r y l a t e d N F-B p 6 5(p-N F-B p 6 5),I B,p-I B w e r e d e t e c t e d b y W e s t e r n b l o t.R e s u l t s C o m p a r e d w i t h t h e P C I V g r o u p,t h e e s c a p e l a t e n c y i n B r e g r o u p a n d T AK 2 4 2 g r o u p w e r e s h o
13、r t e n e d a n d t h e v e s t i b u l a r n u c l e u s b l o o d f l o w w e r e i n c r e a s e d(P0.0 5);t h e w h o l e b l o o d v i s c o s i t y(l o w s h e a r,m e d i u m s h e a r,h i g h s h e a r),p l a s m a v i s c o s i t y,h e m a t o c r i t(HC T),e r y t h r o c y t e a g g r e g
14、 a t i o n 2541西部医学 2 0 2 3年1 0月 第3 5卷第1 0期 M e d J W e s t C h i n a,O c t o b e r 2 0 2 3,V o l.3 5,N o.1 0i n d e x(E A I),e r y t h r o c y t e s e d i m e n t a t i o n r a t e(E S R)w e r e d e c r e a s e d a n d t h e e r y t h r o c y t e d e f o r m a b i l i t y i n d e x(E D I)w a s i n
15、c r e a s e d(P0.0 5);t h e p a t h o l o g i c a l c h a n g e s o f h i p p o c a m p a l n e u r o n s s u c h a s t h e n u m b e r s d e c r e a s e d,t h e a r r a n g e m e n t w a s l o o s e a n d d i s o r d e r e d,t h e p y k n o t i c p y k n o s i s w a s s h i f t e d a n d h y p e r
16、c h r o m a t i c,t h e b o u n d a r y w a s u n c l e a r a n d o t h e r p a t h o l o g i c a l c h a n g e s w e r e s i g n i f i c a n t l y i m p r o v e d;t h e n u m b e r o f a p o p t o t i c h i p p o c a m p a l n e u r o n s w e r e s i g n i f i c a n t l y d e c r e a s e d;t h e c
17、o n t e n t o f L a c,L DH,I L-1,T N F-,I F N-i n h i p p o c a m p u s w e r e d e c r e a s e d,t h e e x p r e s s i o n o f T L R 4 a n d t h e p h o s p h o r y l a t i o n r a t i o o f N F-B p 6 5,I B (p-N F-B p 6 5/N F-B p 6 5,p-I B/I B)w e r e d e c r e a s e d(P0.0 5).T h e e f f e c t o f
18、 B r e+TAK 2 4 2 o n t h e d e t e c t i o n i n d e x e s a b o v e w e r e s i g n i f i c a n t l y b e t t e r t h a n t h a t o f B r e g r o u p a n d T AK 2 4 2 g r o u p(P0.0 5).C o n c l u s i o n B r e c a n r e d u c e v e r t i g o s y m p t o m s,i m p r o v e v e s t i b u l a r n u c
19、l e u s b l o o d f l o w a n d r e d u c e b r a i n t i s-s u e d a m a g e i n P C I V r a t s,w h o s e m e c h a n i s m m a y b e r e l a t e d t o t h e i n h i b i t i o n o f T L R 4/N F-B s i g n a l i n g p a t h w a y t o m e d i-a t e i n f l a mm a t o r y r e s p o n s e s.【K e y w o
20、r d s】B r e v i s c a p i n e;I s c h e m i c v e r t i g o;V e s t i b u l a r n u c l e u s b l o o d f l o w;H e m o r h e o l o g i c a l;T L R 4/N F-B p a t h w a y;I n f l a mm a t o r y r e s p o n s e s 后循环缺血眩晕(P o s t e r i o r c i r c u l a t i o n i s c h e m i c v e r t i g o,P C I V)是因椎
21、-基底动脉供血障碍所致前庭神经系统功能紊乱而引发的空间定位障碍综合征,约占眩晕患者的2 0%3 0%,具体表现为平衡失调、指物偏向、站立不稳、眼球震颤等1。P C I V病理机制较为复杂,其中炎症反应在其进展过程中发挥着重要作用。由T o l l样受体4(T o l l-l i k e r e c e p t o r 4,T L R 4)及其下游核因子 B(N u c l e a r f a c t o r B,N F-B)蛋白组成的信号通路对细胞炎症反应具有重要调控作用,可作为P C I V防治药物研究的靶点2-3。灯盏花素(B r e-v i s c a p i n e,B r e)是由菊
22、科飞蓬属草本植物短葶飞蓬中提取的黄酮类化合物,具有扩张脑血管、改善脑循环等药理学作用,有研究报道B r e通过调控T L R 4/N F-B通路抑制炎症反应对脑外伤大鼠皮质神经元起到保护作用4。本研究旨在探讨B r e对P C I V所致脑组织损伤的影响,并基于T L R 4/N F-B通路探索其作用机制。1 材料与方法1.1 实验动物 取清洁级健康雄性W i s t a r大鼠8 0只,由河北医科大学(实验动物公共服务平台)提供S C X K(冀)2 0 2 0-0 0 1,78周龄,2 3 02 6 0 g。饲养环境:室温2 22 4、湿度4 0%6 0%、1 2 h光暗交替,通风良好,自
23、由饮水进食。实验过程有关动物操作均遵循减少、替代、优化原则,实验方案经承德市中心医院伦理委员审批通过。1.2 药物与试剂 B r e注射液(规格5 m L:2 0 m g)购自石药银湖制药有限公司(国药准字Z 1 4 0 2 1 9 4 2,批号S 2 0 2 1 Y 0 9 0 1 4);T L R 4抑制剂T AK 2 4 2购自美国C e l l S i g n a l i n g T e c h n o l o g y公司(批号2 0 A 3 5 2 F 1 7);HE、TUN E L试剂盒购自长春赛默瑞特科技有限公司(批号2 0 2 1 0 9 0 0 8、2 0 2 1 1 0 0
24、 1 3);乳酸(L a c t i c a c i d,L a c)、乳酸脱氢酶(L a c t a t e d e h y d r o g e n a s e,L DH)、白细胞介素-1(I n t e r l e u k i n-1,I L-1)、肿瘤坏死因子-(T u m o r n e c r o s i s f a c t o r-,T N F-)、干 扰 素-(I n t e r f e r o n-,I F N-)试剂盒购自北京索莱宝生物科技公司(批号B C 2 2 3 0、B C 0 6 8 0、S E K R-0 0 0 2、S E K R-0 0 0 9、S E K R-
25、0 0 0 8);T L R 4、I B、p-I B 抗体购自美国A f f i n i t y公司(批号A F 6 0 7 3、A F 5 8 1 4、A F 5 8 2 6);N F-B p 6 5、p-N F-B p 6 5抗体购自北京博奥森生物技术公司(批号b s-2 3 2 1 6 R、b s-3 5 4 3 R);-肌动蛋白(-a c t i n)抗体、免疫球蛋白(I g)G二抗购自美国 P r o t e i n t e c h公司(批号6 0 0 0 9-1-I g、S A 0 0 0 0 1-2);增 强 化 学 发 光(E n h a n c e d c h e m i l
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