对暗黑鳃金龟幼虫高毒力的球孢白僵菌筛选及其模拟田间防效评价.pdf
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1、 月 ():昆 虫 学 报 :.:./.基金项目:安徽省自然科学基金项目()安徽省教育厅优秀青年人才支持计划()中国烟草总公司四川省公司科技项目()国家级大学生创新创业训练计划()作者简介:朱长建 男 年 月生 安徽芜湖人 硕士研究生 研究方向为害虫生物防治:.马雨梦 女 年 月生 安徽宿州人 本科生 研究方向为害虫综合治理:.共同第一作者 通讯作者 :.收稿日期:接受日期:对暗黑鳃金龟幼虫高毒力的球孢白僵菌筛选及其模拟田间防效评价朱长建 马雨梦 李 斌 梁佳惠 曹 付杨 洋 刘 苏 李茂业(.安徽农业大学植物保护学院 植物病虫害生物学与绿色防控安徽普通高校重点实验室 合肥.中国烟草总公司四川
2、省公司 成都 .四川省烟草公司宜宾市公司 宜宾)摘要:【目的】筛选对暗黑鳃金龟 幼虫具高毒力的球孢白僵菌 菌株并评价最高毒力菌株分别与印楝素和辛硫磷联合使用的模拟田间防效【方法】采用浸虫法通过试虫校正死亡率和致死中时()值评价 株球孢白僵菌对暗黑鳃金龟 龄幼虫的毒力并测定筛选出的 菌株对暗黑鳃金龟 龄和 龄幼虫的致死中浓度()值 将 菌株孢子悬浮液(孢子/)分别与印楝素(/)和辛硫磷(/)联用通过温室盆栽实验评价其对烟草幼苗上暗黑鳃金龟 龄幼虫的防治效果【结果】在 孢子/处理下供试 株球孢白僵菌以 菌株对暗黑鳃金龟 龄幼虫毒力最高其导致的 累计校正死亡率为 值为 该菌株对暗黑鳃金龟 龄和 龄幼
3、虫的 值分别为.和 孢子/盆栽实验中药后 时单独使用 菌株、印楝素和辛硫磷对暗黑鳃金龟 龄幼虫的防效分别为 和.而当 分别与印楝素和辛硫磷联用后对暗黑鳃金龟 龄幼虫的防效分别达到 和 【结论】供试 株球孢白僵菌中 菌株对暗黑鳃金龟幼虫的毒力最高该菌株与印楝素或辛硫磷联用能够提高对暗黑鳃金龟幼虫的防效关键词:暗黑鳃金龟 球孢白僵菌 毒力测定 田间防效评价 生物防治中图分类号:文献标识码:文章编号:()(:)(.):【】昆虫学报 卷 .【】.().().(/)(/)(/).【】././.【】.:蛴 螬 是 鞘 翅 目()金 龟 甲 科()幼虫的统称也是世界分布广泛、危害严重且难防治的一类土栖性害虫
4、(徐蕾等 李而涛等)蛴螬的取食与活动可造成植物组织损伤使得植物根系易感染病害或直接枯死(张美翠等)植物地下部受害的 都是由蛴螬取食农作物的地下根茎及种子造成的(姚庆学等)我国已发现并记载的蛴螬种类约 种对农、林、牧、草业造成危害的蛴螬有上百种(罗晨等)其中暗黑鳃金龟 幼虫是为害较为严重的一种此虫在我国黄淮地区发生量大严重影响当地花生和大豆等农作物的产量和品质(苗雨等 吴鹤敏等)目前针对暗黑鳃金龟幼虫的防治主要依靠化学杀虫剂(尹炯等 李晓等)而化学药剂的不合理使用不仅使害虫抗药性逐渐增强导致农药使用量不断上升而防治效果却不断降低而且造成环境污染杀伤天敌破坏农田生物多样性和生态平 衡(.)昆 虫
5、病 原 真 菌()亦称虫生真菌是一类能够从体表侵入昆虫体内并使昆虫感病致死的真菌(.吴圣勇等)昆虫病原真菌可在自然环境中造成流行病能够实现对害虫种群数量的持续控制从而降低化学农药的使用量延缓害虫抗药性发展同时减少环境污染(曹伟平等)一些具有杀虫作用的昆虫病原真菌种类已被商品化在农林害虫的防治中发挥了重要作用(.李增智)目前在昆虫病原真菌防控蛴螬方面国内外已报道球孢白僵菌 、布氏白僵菌.和 金 龟 子 绿 僵 菌 等均能侵染包括暗黑鳃金龟幼虫在内的多种蛴螬种类(林华峰等 殷幼平等 余佳敏等 .)虽然球孢白僵菌在实验室条件下对蛴螬具有较强的致病性但在田间应用中其仍然存在着对土壤环境适应性较弱及杀虫
6、速度较慢等问题(农向群和张泽华)因此有学者研制了颗粒型载体不仅延长了球孢白僵菌在土壤中宿存的时间而且可以使球孢白僵菌与苏云金杆菌 在载体上共同增殖提升了对蛴螬的防效(刘琪等)也有学者将昆虫病原真菌与化学杀虫剂联合使用防治花生田蛴螬发现将化学杀虫剂剂量减半后对蛴螬的田间防效与使用常规剂量化学农药时无显著差异(谢明惠等)这些研究也为防治暗黑鳃金龟幼虫及其他蛴螬种类提供了新思路筛选对暗黑鳃金龟幼虫具高毒力的昆虫病原真 期朱长建等:对暗黑鳃金龟幼虫高毒力的球孢白僵菌筛选及其模拟田间防效评价菌菌株是获取生防真菌新资源的有效途径 本研究测定了 株球孢白僵菌的生物学性状及对暗黑鳃金龟幼虫的毒力筛选出了对暗黑
7、鳃金龟幼虫具有高致病力的 菌株并评价了该菌株单独使用以及分别与印楝素和辛硫磷联合使用的模拟田间防效以期为利用该菌株开发暗黑鳃金龟幼虫生物防治新资源提供前期基础 材料与方法.材料.供试菌株:株球孢白僵菌均从田间采集的自然感病僵虫上分离纯化获得经鉴定后保存于本实验室 菌株信息见表 表 供试 株球孢白僵菌的寄主及原始采集地 菌株 寄主 原始采集地 斜纹夜蛾 安徽蚌埠 东亚飞蝗 安徽蚌埠 小菜蛾 安徽和县 褐飞虱 安徽滁州 马尾松毛虫 安徽含山 沫蝉未鉴定种 安徽黄山 棉铃虫 安徽望江 大黑鳃金龟 安徽滁州 大黑鳃金龟.安徽肥东 茶尺蠖 安徽金寨 .供试昆虫:暗黑鳃金龟幼虫采集自安徽省宿州市灵璧县花生
8、田在安徽农业大学植物保护学院昆虫饲养室内使用花生苗饲养 饲养条件为:温度()相对湿度()光周期 选择体型大小一致的试虫用于实验.供试杀虫剂:.印楝素乳油为成都绿金生物科技有限责任公司产品 辛硫磷乳油为连云港立本作物科技有限公司生产.菌落形态观察将供试 株球孢白僵菌接种于萨氏葡萄糖琼脂培养基 酵 母 提 取 物()培养平板上在培养箱()、全黑暗环境中培养 将菌丝和分生孢子从平板上刮下 在 吐温 水溶液中充分悬浮后用双层擦镜纸滤去菌丝获得孢子悬浮液并将其浓度稀释至.孢子/吸取.孢子悬浮液点接于直径 的 培养平板中心位置待液滴被培养平板吸收后将平板放置于()、全黑暗环境下培养 观测记录菌落颜色、形态
9、和孢子粉色泽.菌落直径、产孢量和孢子萌发率测定将供试 株球孢白僵菌分别接种于 培养平板上接种过程同.节 采用十字交叉法分别于接种后 和 测量菌落直径 接种 后用正方形打孔器()分别在十字测量线的交叉点以及测量线与菌落边缘交叉处取菌块 个置于 .吐温 水溶液中漩涡振荡 用血球计数板测定孢子数量计算产孢量将孢子配制成.孢子/的孢子悬浮液吸取 滴在铺有一层 培养基的载玻片上置于()、全黑暗环境下培养 统计孢子萌发率 以上实验均设置 个生物学重复.室内毒力测定用.吐温 水溶液将供试 株球孢白僵菌的分生孢子配制成浓度为.孢子/的悬浮液 采用浸虫法将暗黑鳃金龟 龄幼虫分别在各菌株孢子悬浮液中浸 取出后让其
10、在洁净的滤纸上自由爬行以除去体表多余菌液 对照组试虫使用.吐温 水溶液处理 随后将试虫置于饲养盒(长 宽 高 )内每盒 头试虫 饲养盒内已提前铺满一层经过高温灭菌的细土并放入新鲜花生苗作为试虫食物待试虫自行钻入土中后将饲养盒放入()光周期 的养虫室每日观察死亡虫数连续观察 将死虫及时挑出转移至洁净的培养皿中用湿滤纸保湿观察试虫体表有无昆虫学报 卷菌丝生长以确定是否为球孢白僵菌侵染致死 每处理设 个生物学重复每个重复包含 头试虫.菌株的致病性测定将筛选出的高毒力菌株 配制为 个浓度的孢子悬浮液(.和.孢子/)采用浸虫法测定该菌株对暗黑鳃金龟 和 龄幼虫的致病性(实验步骤同.节)其中 龄幼虫连续观
11、察 龄幼虫连续观察 选取.孢子/孢子悬浮液处理的 和 龄幼虫在体视镜下每天观察试虫体表特征变化.盆栽试验在安徽农业大学植保基地温室中进行盆栽实验供试作物为烟草品种为云烟 烟草播种于育苗盘中出苗 后移栽至塑料花盆()每盆 株待其继续生长 后选取长势一致的健壮植株用于试验试验共设 个处理组:孢子悬浮液(.孢子/)印楝素(/)辛硫磷(/)将印楝素在(.孢子/)悬浮液内稀释至 倍(/)将辛硫磷在(.孢子/)悬浮液内稀释至 倍(/)对照组(不施药)以上处理组中每盆烟株均人工接入 头暗黑鳃金龟 龄幼虫 待幼虫正常入土后采用穴施法对烟株根部进行灌根药液用量为 /株以使真菌孢子和药剂充分渗透土壤 对照组施加等
12、量清水 每个处理组设 次生物学重复每个重复包含 盆烟株 施药 后记录各处理存活虫数计算虫口减退率和校正防效.数据分析使用 软件对实验数据进行初步统计计算校正死亡率、虫口减退率和校正防效 使用 .软件(唐启义)进行统计分析计算致死中时()值与致死中浓度()值不同处理组之间的数据差异显著性使用单因素方差分析和 氏新复极差法进行多重比较 计算公式为:校正死亡率()(处理组死亡率 对照组死亡率)/(对照组死亡率)虫口减退率()(对照区活虫数 处理区施药后活虫数)/对照区活虫数 校正防效()(处理区虫口减退率 对照区虫口减退率)/(对照区虫口减退率)结果.供试菌株的菌落形态和培养性状供试 株球孢白僵菌的
13、菌落均呈毛毡状各菌落由内向外皆呈轮纹状但形态有差异其中 和 中间凹入有环状脊沟纹外缘放射状脊沟纹明显(图:)各菌株在平板上的菌落颜色及孢子粉色泽有差异 的菌落颜色为乳黄色(图:)和 为乳白色(图:)其余菌株均为白色(图:)和 孢子粉为淡黄色(图:)而 和 孢子粉为白色或黄白色(图:表)图 株球孢白僵菌在 培养基上的菌落形态.:.:萨氏葡萄糖琼脂培养基 酵母提取物 .表 和 同 .期朱长建等:对暗黑鳃金龟幼虫高毒力的球孢白僵菌筛选及其模拟田间防效评价表 株球孢白僵菌在 培养基上的菌落特征 菌株菌落颜色 菌落形态 孢子粉色泽 乳白色 毛毡状 乳白色 白色 毛毡状 乳白色 乳白色 毛毡状 白色 乳黄
14、色 毛毡状 淡黄色 白色 毛毡状 淡黄色 白色 毛毡状 黄白色 白色 毛毡状 淡黄色 乳白色 毛毡状 黄白色 乳白色 毛毡状 黄白色 白色 毛毡状 淡黄色 从表 可以看出供试 株球孢白僵菌的菌落直径(:.:.:.)、产孢量(.)和孢子萌发率(.)均存在显著差异 培养 时 的菌落直径最大为.其次是 为.和 的 产孢量在供试菌株中较高分别为.和.孢子/显著高于其他供试菌株(.)株供试菌株 内孢子萌发率均.其中 和 的孢子萌发率较高分别为.和.显著高于其他菌株的孢子萌发率(.).供试菌株对暗黑鳃金龟 龄幼虫的毒力从表 可以看出供试 株球孢白僵菌对暗黑鳃金龟 龄幼虫均具有毒力但不同菌株引起的 累计校正
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