肺部感染中STING炎症信号通路的免疫作用机制研究.pdf
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1、肺部感染中 炎症信号通路的免疫作用机制研究李清权 许华平 刘金环 【摘要】目的 探讨干扰素基因刺激物()炎症信号通路在金黄色葡萄球菌(.)诱导的肺部感染和免疫中的作用机制 方法 只小鼠随机分为 组:对照组、/和 /组每组 只/组和小鼠腹腔注射金黄色葡萄球菌()对照组小鼠腹腔注射 分别在注射前和注射后 和 各组随机选取 只小鼠收集血清和肺组织 采用 试剂盒检测、和 水平以及免疫荧光测定高迁移率组框蛋白()水平 结果与对照组相比/小鼠腹膜内注射.后 的存活率为 然而 /小鼠在腹腔注射.后 的存活率为 与/小鼠相比 /组小鼠在.感染后 肺和血清、和 水平均显著降低()而 /组小鼠在.感染后 肺和血清
2、、和 水平均显著升高()在.感染期间 /小鼠肺中 的表达在感染后 时显著低于/小鼠()在感染后 时显著高于/小鼠()结论 在.感染过程中 可以调节免疫驱动的抵抗和耐受之间的平衡从而影响体内炎症介质的产生进而改善肺损伤程度和死亡率【关键词】干扰素基因刺激物金黄色葡萄球菌肺部感染免疫小鼠 /【】()(.).:/./().()./././.()/.()./()./().【】:./.基金项目:湖北省卫生健康委员会项目(.)作者单位:湖北 荆门荆门市中心医院 荆楚理工学院附属荆门市中心医院 儿科通信作者:许华平:.临床肺科杂志 年 月 第 卷第 期 肺部是最常受金黄色葡萄球菌(.)影响的器官之一 在.感
3、染期间肺泡巨噬细胞和树突状细胞被募集到感染部位并有助于细菌清除但也可能加剧肺部炎症和损伤 因此这些免疫细胞和病原体之间的早期相互作用对于确定.感染疾病的结果很重要 先天免疫系统检测病原体相关分子模式通过激活模式识别受体快速响应包括干扰素基因刺激物()这是宿主防御微生物感染的第一道防线 作为感染环境中炎症的重要介质参与调节促炎和抗炎细胞因子的分泌 然而.是否能激活 信号通路并通过 介导促炎和抗炎细胞因子的分泌尚不清楚 因此本研究分析了/小鼠、/小鼠在.感染期间死亡率、炎症介质产生和器官损伤的差异资料与方法一、细菌菌株和动物金黄色葡萄球菌 购自美国典型培养物保藏中心()将细菌菌株在 阳离子调节肉汤
4、(肉汤美国 公司)中于 培养 同时不断摇晃至 处的光密度为 周龄/和 缺陷型(/)小鼠由南京大学模式动物研究所提供 将小鼠安置在微型隔离笼中并随意接受食物和水 实验室温度为()在实验之前将小鼠安置至少 以适应环境 本研究动物实验经本院伦理委员会审批同意(伦审)二、小鼠的实验性感染和治疗实验分两部分 第一部分考察 在调节.感染诱导的小鼠死亡率中的作用 使用计算机随机化表将 只小鼠随机分为 组:对照组、/组和 /组 每组 只/组和 /组小鼠腹腔注射金黄色葡萄球菌()对照组小鼠腹腔注射 连续观察 内动物存活情况 第二部分考察 对.感染期间炎症介质产生和器官损伤的影响 使用计算机随机化表将 只小鼠随机
5、分为 组:对照组、/组和 /组 每组 只/组和 /组小鼠腹腔注射金黄色葡萄球菌()对照组小鼠腹腔注射 分别在注射前和注射后 和 各组随机选取 只小鼠收集血清和肺组织用于炎症介质和器官损伤分析三、酶联免疫吸附试验()将收获的肺切成小块并称重 然后将组织均质化并用 组织蛋白提取试剂(美国 公司)进行裂解然后在 下以 离心 收集血清后小鼠血清在 下孵育 然后在 下孵育过夜 随后将血清以 离心 收集上清液 使用、(美国 公司)和(美国 公司)的 试剂盒检测、和 水平四、肺的组织病理学从左下叶收集的肺组织样本用 福尔马林固定石蜡包埋切成 切片 对于组织学检查石蜡切片用 苏木精和 伊红染色 通过光学显微镜
6、和摄影系统观察和评估切片 将小鼠的冷冻 肺组织切片在室温下解冻 然后在冷丙酮中固定 将解冻的切片在含有 的冷 中洗涤并在室温下在 牛血清白蛋白中封闭 添加兔抗高迁移率组框蛋白()单克隆抗体(英国 公司)切片在 黑暗中孵育过夜 孵育后使用含 的 洗涤载玻 次每次 然后在 偶联山羊抗兔 二抗(英国 公司)中室温避光孵育 采用 共聚焦显微镜(德国 公司)捕获图像(放大倍率)和分析荧光强度 从每个样品中随机选择三个捕获场之一并用于荧光强度分析 在相同条件下捕获来自不同样本的图像五、数据分析使用 分析所有数据并表示为 偏差 通过重复测量方差分析评估多组间差异并使用 事后检验分析统计显著性 认为差异具有统
7、计学意义结 果一、在调节.感染诱导的小鼠死亡率中起关键作用采用 缺陷型(/)小鼠研究临床肺科杂志 年 月 第 卷第 期 在调节.感染诱导的小鼠死亡率中的作用(图)/小 鼠 腹 膜 内 注 射.后 的存活率为 /小鼠在腹腔注射.后 的存活率为(图)肺组织的组织病理学分析显示.感染导致小鼠肺组织出现严重的病理变化如肺泡破坏和肺泡腔扩张 /小鼠肺损伤程度进一步加重(图)图 验证 /小鼠肺组织中 敲除图 对数秩检验用于比较实验组之间的生存差异()与对照组相比 图 染色检测感染后 小鼠肺组织病理变化():对照组:/组:/组 二、参与.感染小鼠的促炎细胞因子、抗炎细胞因子和趋化因子的产生与/组相比 /组小
8、鼠在.感染后 肺和血清、和 水平均显著降低()而 /组小鼠在.感染后 肺和血清、和 水平均显著升高()(表 )三、可 以 减 弱.诱 导 小 鼠 的表达在.感染期间 /小鼠肺中 的表达在感染后 时显著低于/小鼠()在感染后 时显著高于/小鼠()(图 表)图 免疫荧光检测感染前、感染后 和 小鼠肺组织中 的表达()比例尺 讨 论.是一种革兰氏阳性细菌通常作为位于前鼻孔表面的共生细菌发现 然而它具有多种表 分析小鼠肺和血清中 水平(感染前、感染后 和 )组别血清(/)基线 时间时间肺(/)基线 时间时间对照组 ./组 /组 组间.组间.组间 时间.组间 时间.注:与/组相比 临床肺科杂志 年 月
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