流程图绘制入门技巧及实战案例(产品经理如何绘制出高逼格的流程图)ppt课件.ppt
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1、组成,常用光学玻璃、石英等透明、稳定的材 料制作。设计和制作均很精细,是液流系统的心脏。 样品管贮放样品,单个细胞悬液在液流压力作用下从样品管射出;鞘液由鞘液管 从四周流向喷孔,包围在样品外周后从喷嘴射出。为了保证液流是稳液,一般限 制液流速度。由于鞘液的作用,被检测细胞被限制在液流的轴线上。流动室上装 有压电晶体,受到振荡信号可发生振动。 43 液流中心由单列匀速运动颗粒组成的液柱 4444 流式细胞仪的电子系统 进行信号检测和分析 = 当细胞携带荧光素标记物,通过激光照射区时,受到激发, 产生不同波长的、代表 细胞内不同物质的荧光信号 = 经荧光染色的细胞受合适的光激发后所产生的荧光是通过
2、光电转换器转变成电信 号而进行测量的。光电倍增管(PMT)最为常用。 = 从PMT输出的电信号仍然较弱,需要经过放大后才能输入分析仪器。 = 数字信号传送到计算机,计算机把所测量到的各种信号进行处理、储存、 作图 、 统计分析,将分析结果显示 在计算机屏幕上,也可以打印出来,还可以数据 文件的形式存储在硬盘上以备日后的查询或进一步分析。 45 强大的数据处理系统强大的数据处理系统 =Macintoshi系统,灵活多样的图形处理能力 目前公认的最佳图像处理系统,使流式细胞仪的功能发挥更 加完美。 强大的软件支持,灵活方便的数据处理功能 =仪器自动校检软件FACSComp =主软件CELLQues
3、t =全面的自动化临床应用软件: 淋巴细胞自动检测软件SimulSET;MultiSET 干细胞自动检测软件ProCOUNT HLA-B27; ModFIT; 4646 流式细胞仪数据分析流式细胞仪数据分析 根据分析目的不同,对制备好的样本在流式细胞仪上 测量其光散射和荧光强度。一般在测样本前先应用荧光标 准微球校准仪器,多色分析 时还应进行颜色补偿,以避免 多色荧光间信号的相互干扰。 仪器校准后测量样本,每个细胞的光散射及荧光测量 数据一般以列表或矩阵方 式储存于计算机中,然后进行数 据的显示、图象分析和结果统计处理,最终获得所分析细 胞的信息,也可在测定的同时进行结果分析。 47 流式细胞
4、仪数据分析流式细胞仪数据分析 =数据存储: List Mode 4848 数据的显示 储存的数据文件虽然易于加工、处理、分析,但由于数据大 ,又缺乏直观性,不利于观察各参数及其相互的关系。因此, 将数据用图形显 示更直观,然后再进行统计分析,这是FCM 结果分析中最常用的分析方法。FCM数据显示通常有一维直方 图、二维点图、二维密度图、二维等高图、假三维图等。 49 由一维参数(散射光或荧光)与颗粒计数 (COUNT)构成,反映同样散射光或荧光 强度的颗粒数量的多少。 单参数直方图 50 单参数直方图 细胞相对数量 荧光信号相对 强度值(对数 ) 图中已根据阴性对照设定适当的“门”(直线门),
5、 仪器的计算机就会给出测定值(包括阳性细胞%和平均荧光强度) 51 图中100101(M1)为阴性细胞,101以上的(M2)为阳性细胞 52 n双参数散点图:纵轴和横轴分别代表被测 量细胞的两个测量参数,根据这两个参数 就可以确定细胞在图上的表达位置。 n双参数信号通常采用对数信号,最常用的 是点密图,在图中,每个点代表一个细胞 ,点图利用颗粒密度反映同样散射光或荧 光强度的颗粒数量的多少。 双参数散点图 53 1.双参数散点图 绿色荧光强度 红色荧光强度 54 双参数点图 55 2. 二维等高图 n由类似地图上的等高线组成,其本质也是 双参数直方图。 n等高图上每一条连续曲线上具有相同的细
6、胞相对或绝对数,即“等高”。 n曲线层次越高(越里面的线) 所代表的细胞 数愈多。 n等高线越密集则表示细胞数变化率越大。 56 =等高图和密度图分析 二维等高图类似于地图上的等高线表示法。它是为了克服二维点图的不足而设置的显示方法。 等高图上每一条连续曲线上具有相同的细胞相对或绝对数,即“等高”。曲线层次越高所代表的细 胞数愈多。一般层次所表示的细胞数间隔是相等的,因此等高线越密集则表示变化率越大,等高 线越疏则表示变化平衡。 57 3. 假三维等高图 58 三参数直方图 三个荧光数据关系用分光图(prism)表示,分光图可直接给出8个数据(如用ABC代表3种荧 光,可有A+B+C+、A+B
7、+C- 、A+B-C-、 A-B+C+、 A-B+C-、 A-B-C+、 A+B-C+ 、A-B-C-) 。 59 流式细胞计是对细胞进行自动分析和分 选的装置。它可以快速测量、存贮、显 示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重 要的生物物理、生物化学方面的特征参 量,并可以根据预设的参量范围把指定 的细胞亚群从中分选出来。 、样品分选 60 细胞分选的原理 当经荧光染色或标记的单细胞悬液放入样品管中, 被高压压入流动室内。流动室内充满鞘液,在鞘液 的包裹和推动下,细胞被排成单列,以一定速度从 流动室喷口喷出。在流动室的喷口上配有一个超高 频的压电晶体,充电后振动,使喷出的液流断裂为 均匀的液滴,待
8、测细胞就分散在这些液滴之中。将 这些液滴充以正、负不同的电荷,当液滴流经过带 有几千伏的偏转板时,在高压电场的作用下偏转, 落入各自的收集容器中,没有充电的液滴落入中间 的废液容器,从而实现细胞的分离。 61 流式细胞分选的特点 1. 少量细胞分选时,流式细胞分选精确度高(99%以上), 速度快。目前,先进的流式细胞仪的分选速度可达25 000个 细胞/秒以上,比传统的分选速度提高了很多倍,原来需要 一天的工作现在只需要几小时就能完成。不过流式细胞仪分 离细胞的量还是有一定的限制,一次分离的最大合理量约为 108个细胞。如果细胞量超过109个,则需要耗费10小时以上 ,分选后细胞的活力会受到很
9、大的影响。 2. 可以同时进行多个Marker分选,正选负选同时进行。以前 的流式细胞仪只能给液滴充上正电荷或负电荷,因此在电场 中只能向左或向右偏转,即两路分选。现在的仪器可以给液 滴充以不同的电量,从而调整液滴的偏转角度,实现多路分 选。BD的FACSAria流式细胞仪就可以进行四路分选。 62 3. 不仅仅限于表面抗原,流式细胞仪可以根据任何能检测 到的发光度(如细胞体积)或荧光(如DNA、RNA或蛋白 含量,酶活性,特异抗原)散射度差异来分离细胞。如果 能保证流式细胞仪的无菌状态,那么分选后的细胞还可以 进行培养或其他分析。 4. 如果只是偶尔做几次细胞分选的话,用流式分选还是比 较划
10、算的,只需要准备样品和抗体,交纳一定的仪器使用 费即可,不需要购买配套的设备。 63 细胞分选细胞分选原理原理 6464 3 3、配套设施、配套设施 =数据处理系统Macintoshi系统 =Autoloader自动进样系统: 40管轮盘,软件 支持,简单易操作,真正实现无人操作 =样本制备仪: =免疫样本制备仪 =DNA样本制备仪 6565 4 4、流式细胞仪的分类、流式细胞仪的分类 66 67 大型机 FACS Vantage SE =多激光多波长 =八特征参数 =设计灵活 =高速分选 =单细胞点对点分选 68 台式机 FACSCalibur =双激光:488nm/635nm =四荧光六分
11、析参数 =自动化程度高 =分析速度快 =灵活的设计 =细胞分选系统 细胞富集系统 69 BD FACSDivaBD FACSDiva 型流式细胞仪型流式细胞仪 =三激光三激光 =八荧光十参数分析八荧光十参数分析 =自动补偿自动补偿 =四通道分选四通道分选 =点对点分选点对点分选 70 BD FACSCountBD FACSCount 型流式细胞仪型流式细胞仪 最简化的样本处理过程,很好地防生物污染 完善的自动采样,自动分析出报告系统,防人为因素干扰 严格完整地质控及对照系统,确保结果的准确性,可靠性 完善的CD4,CD8,CD3绝对计数系统 专为HIV监测设计的经济普及型流式细胞仪 71 BD
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