02 微电子制造装备概述ppt课件.ppt
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1、in, 4C保存。反应在PCR扩增仪(热循环仪)上进行。 A. 7. 3 Wxmw分子标记的PCR反应程序 95C下预变性3min; 95C下变性30s, 55C退火30s, 72C下延伸min,共33个循环72C延 伸5min, 4C保存。反应在PCR扩增仪(热循环仪)上进行。 A.8 PCR产物检测 A. 8. 1 琼脂糖凝胶制备 在三角瓶中将琼脂糖与1xTAE缓冲液按1.5%质量比混合,煮沸至琼脂糖颗粒完全溶解,按1:10000 (体积比)加入核酸染料,摇匀后倒入制胶槽托盘板上,插上样品梳,冷却凝固后拔出样品梳,备用。 A.8.2 上样样晶制备 在20uL的PCR扩增产物中加入4uL6x
2、上样缓冲液,混匀。 A.8.3 电泳 将琼脂糖凝胶放入电泳槽,加入1xTAE缓冲液至刚没过凝胶,每个样品孔加入5uL上样样品,以 20V/cm的电压进行电泳,电泳20mino A.8.4 凝胶成像 将电泳后的琼脂糖凝胶放于凝胶成像系统的紫外光源下进行PCR扩增产物观察,拍照备用。用成 对引物元mq_FIR扩增得到的PCR条带需割胶回收、回收试剂盒纯化后,送测序公司进行序列分析。 A. 9 结果分析 A. 9.1 分子标记检测结果分析 利用四号|物附陀Tf元叩-O-F/O-R/I-F/I-R分子标记可扩增得到三种类型的DNA特征条带(图A.2), 扩增得到439bp和292bpDNA条带的样品,
3、证明含第4外显子突变位点:扩增得到439bp和200bpDNA 条带的样品,证明不含此突变位点,同时扩增得到439坤、292bp和200bpDNA条带的样品,证明此突 变位点为杂合位点。 利用成对引物Wxmq-FIR分别作为测序引物,可获得DNA条带的核昔酸序列(图A.3),如第5夕|、 3 DB32/ T 4056-2021 显子第52位为C碱基,证明含此突变位点,女口为T碱基,证明不含此突变位点,如为T/C碱基叠加, 证明此突变位点为杂合位点。 利用四号|物w飞O-F/O-R/T-F/T-R可扩增得到三种类型的DNA特征条带(国A.4):扩增得到459bp 和301bpDNA条带的样品,证
4、明含wxl1lW突变位点:扩增得到459bp和209bpDNA条带的样品,证明 不含此突变位点,同时扩增得到459bp、301bp和209bpDNA条带的样品,证明此突变位点为杂合位点。 M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 EL-C:; .; -1回国 nr hu 回咽-. 92 b口 250 DP-C=口 . .-:;噩噩51- 00 b口 100 00 (M:分子量标准1,7-10为含第4外显子突变位点的特征条带,2-6为不含第4外显子突变位点的特征 条带,11-12为杂合位点的特征条带) 图A.2Wxmp或Wx呻第4外显子突变位点的分子标记检测电泳图i昔 第5外显于
5、 10口3040口607口8090 (bp) 1, GTTTGGGGAAAGACCGGTGAGAAGATCTACGGACCTGACACTGGAGTTGATIACAAAGACAACCAGATGCGTTTCAGCCTTCTTTGCCAG 2, GTTTGGGGAAJ.GACCGGTGAGAAGATCTACGGACCTGACACTGGAGTGA C IACAAAGACAACCAGATGCGTTTCAGCCTTCTTTGCCAG 3, GTTTGGGGAAAGACCGGTGAGAAGATCTACGGACCTGACACTGGAGTTGATIACAAAGACAACCAGATGCGTTTCAGCCTTCTT
6、TGCCAG 4, GTTTGGGGAA.o.GACCGGTGAGAAGATCTACGGACCTGACACTGGAGTTGA C IACAAAGACAACCAGATGCGTTTCAGCCTTCTTTGCCAG 5, GTTTGGGGAA.o.GACCGGTGAGAAGATCTACGGACCTGACACTGGAGTTGA T IACAAAGACAACCAGATGCGTTTCAGCCTTCTTTGCCAG GTTTGGGGAAAGACCGGTGAGAAGATCTACGGACCTGACACTGGAGTTGATCAA.GACACCAGATGCGTTTCAGCCTTCTTTGCCAG 7, GTTTGG
7、GGAAAGACCGGTGAGAAGATCTACGGACCTGACACTGGAGTTGAll T CAA.也GA巳i.ACCAGATGCGTTTCAGCCTTCTTTGCCAG 8, GTTTGGGGAA.o.GACCGGTGAGAAGATCTACGGACCTGACACTGGAGTGAl1 T IACAAAGACAi.CCAGATGCGTTTCAGCCTTCTTTGCCAG 9, GTTTGGGGAAAGAO:GGTGAGAAGATCTACGGACCTGACACTGGAGTTGAll T CAA.GACACCAGATGCGTTTCAGCCTTCTTTGCCAG 10, GTTTGGGGAAAG
8、ACC.(, TGAGAAGATCTACGGACCTGACACTGGAGTTGAll T IACAAAGACAACCAGATGCGTTTCAGCCTTCTTTGCCAG 11, GTTTGGGGAAAAr CG(干 fGAGAAGATCTACGGACCTGACACTGGAGTTGA1Tr,吃队CAAAGACAACCAGATGCGTTTCAGCCTTCTTGCCAG 12, GTTTGGGGAAAGACCGGTGAGJ.卢TCTACGGACCTGACACTGGAGTTGA!dACAo.AGACAACCAGATGCGTTTCAGCCTTCTTTGCCAG 0,4为含第5外显子突变位点的特征序列,1
9、.3,5-10为不含第5外显子突变位点的特征序列,11-12为杂 合位点的特征序列) 图A.3Wxnq第5外显子突变位点的核昔酸序列分析 M1 2345 G 7 d 9 2000 1000 750 500 250 bp 1 bp bp 100 4 DB32/ T 4056-2021 (M:分子量标准1,4,8,9为含第5外显子突变位点的特征条带,2,6-7为不含第5外显子突变位点的特 征条带,3,5为杂合位点的特征条带) 图A.4的mw.第6夕|、显子分子标记检测的电泳图谱 A.9.2 判定原则 用A.5.1中所述两种分于标记wxmq/wxmp-O-F/O-R/T-F/T-R和阶mq_FIR分
10、别对第4和第5外显于突 变位点进行PCR扩增,仅可扩增得到含第4外显子突变位点的DNA特征条带,则判定为携带阶mp的 半糯根稻,可扩增得到含第4和第5外显子两个突变位点的DNA特征条带,则判定为携带Tf竹W元n叫 糯粮稻,不能扩增得到含第4外显子突变位点的DNA特征条带,则判定持检样品中不含Wx叫和Wxmp 基因。 如用A.5.2中所述分子标记Wxmw-O-F/O-R!l-F/I-R对第6外显子突变位点进行PCR扩增,可扩增得 到含突变位点的DNA特征条带,则判定为携带Wxl1lW的半糯枝稻,不能扩增得到含突变位点的DNA特 征条带,则判定待检样品中不含Wxl1lW基因。 5 目次 前言 1
11、范围1 2 规范性引用文件1 3 术语和定义1 4 试验原理1 5 试验项目3 6 试验条件4 7 仪器设备4 8 试验步骤及结果判定5 参考文献8 JT/ T 4432021 前言 本标准按照 GB/ T 1. 12009 给出的规则起草。 本标准代替 JT/ T 4432001液压舵机推舵油缸试验方法,与 JT/ T 4432001 相比,除编辑性修 改外主要技术变化如下: 增加了最低启动压力、无杆腔、负载效率等术语和定义(见第 3 章); 增加了试验原理,以及“双作用活塞式液压缸型式检验的液压系统原理图”及“单作用柱塞式 液压缸试验的液压系统原理图”(见第 4 章); 删除了试验项目中出
12、厂检验中的缓冲试验项目(见第 5 章,2001 年版的第 6 章); 修改了液压缸内部清洁度要求(见 6. 3,2001 年版的 3. 4); 删除了环境条件试验(见 2001 年版的 5. 1); 修改了液压缸的启动压力特性试验、耐压试验、泄漏试验、耐久性试验、最低稳定速度试验、拆 检的相关试验方法和产品技术性能要求(见第 8 章,2001 年版的第 5 章); 修改了试验顺序,将耐久性试验调至泄漏试验之后(见 8. 4 及 8. 5,2001 年版的 5. 5 及 5. 6)。 本标准由全国内河船标准化技术委员会(SAC/ TC 130)提出并归口。 本标准负责起草单位:武汉长江船舶设计院
13、有限公司。 本标准主要起草人:李乾、王勇、王前进。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为: JT 41241982; JT/ T 4432001。 JT/ T 4432021 液压舵机推舵液压缸试验方法 1 范围 本标准规定了往复式液压舵机推舵液压缸试验的试验原理、试验项目、试验条件、仪器设备、试验步 骤及结果判定。 本标准适用于往复式双作用活塞式推舵液压缸和往复式单作用柱塞式推舵液压缸的型式检验和出 厂检验。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。 凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
14、GB/ T 133422007 船用往复式液压缸通用技术条件 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 最低启动压力 minimum breakout pressure 液压缸启动的最小压力。 GB/ T 133422007,定义 3. 1 3.2 无杆腔 cavity without piston rod 液压缸没有活塞杆的一腔。 GB/ T 133422007,定义 3. 2 3.3 负载效率 load efficiency 液压缸实际输出力与理论输出力的比值。 GB/ T 133422007,定义 3. 3 4 试验原理 双作用活塞式液压缸型式检验的液压系统原理见图 1,出厂
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