临床免疫检验的质量保证课件.ppt
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1、临床免疫检验的质量保证第一节 概述 一、与质量保证相关的定义 二、实验方法诊断效率评价第二节 免疫检验的质量控制原则 一、标本的正确收集及处理 二、标准化操作及流程 三、标准品和质控品的应用 四、实验室的环境、设施和设备第三节 质量保证、室内质控和室间质评之间的关系第四节 常用免疫检验的质量控制 一、免疫检验质量控制中常用统计学方法的选择 二、定性免疫检验 三、定量免疫检验第五节 免疫检验室内质量控制的数据处理 一、免疫检验质量保证的意义 思考题小结 第一节 概述 为保证病人临床诊疗或临床实验研究的有效性,临床实验室采取一系列有效的措施证明其测定数据能够达到所确定的质量标准,这就是质量保证的内
2、容。 l质量保证(Quality Assurance,QA) 为一产品或服务满足特定质量要求提供充分可信性所必要的有计划的和系统的措施。 l室内质量控制(Internal Quality Control,IQC) 由实验室工作人员,采取一定的方法和步骤,连续评价本实验室工作的可靠性程度。一、与质量保证相关的定义l室间质量评价 (External Quality Assessment, EQA) 为客观比较一实验室的测定结果与靶值的差异,由外单位机构客观地评价实验室的结果,发现误差并校正结果l准确度 (accuracy) :待测物的测定值与其真值的一致性程度。l偏倚 (bias) 待测物的测定值
3、与一可接受参考值之间的差异。l精密度(precision) 在一定条件下所获得的独立的测定结果之间的一致性程度。准确度好的实验,其精密度不一定好;准确度差的实验,其精密度则不一定差;反之亦然。 测定的精密度与准确度之间的关系l 重复性条件(repeatability conditions) 是指在短的间隔时间内,在同一实验室对相同的测定项目使用同一方法和同一仪器设备,由相同的操作者获得独立的测定结果的条件。l批 (Run) 在相同条件下所获得的一组测定。 l均值(Mean) l标准差(Standard deviation, SD)l变异系数(Coefficient of variation,
4、CV) l正态分布(Gaussian distribution) 当一质控物用同一方法在不同的时间重复多次测定,得到一个两头低,中间高,中为所有测定值的均值,左右对称的“钟形”曲线,又称高斯分布。 l正态分布的基本统计学含义可用均数、标准差(s)和概率来说明。l诊断敏感性(sensitivity of diagnosis) 是指将实际患病者正确地判断为阳性(真阳性)的百分率。l诊断特异性(specificity of diagnosis) 是指将实际无病者正确地判断为阴性(真阴性)的百分率。二、实验方法诊断效率评价l诊断效率(efficiency of diagnosis) 是指能准确区分患者
5、和非患者的能力。l阳性预测值(positive predictive value, PPV) 是指特定试验方法测定得到的阳性结果中真阳性的比率。l阴性预示值(negative predictive value, NPV) 是指特定试验方法测定得到的阴性结果中真阴性的比率。第二节 免疫检验的质量控制原则l标本类型及采集容器l标本采集时间及患者准备l内源性干扰因素l外源性干扰因素一、标本的正确收集及处理l最常用的标本:血液,包括血清、血浆和全血。唾液或尿液 。l建议采用真空采血管及蝶形针具,以免直接接触血液。采集容器最好为一次性无菌密闭容器。标本类型及采集容器 标本采集时间及患者准备l激素和治疗药
6、物l感染性病原体抗原、抗体l肿瘤标志物l特定蛋白内源性干扰因素 l类风湿因子、补体、异嗜性抗体、治疗性抗体、自身抗体、溶菌酶、磷脂、药物小分子、总蛋白浓度等l稀释标本l改变标记抗体l用变性IgG预先封闭标本中RFl测抗原,可加入还原剂如2-巯基乙醇去除RFl使用特异的鸡抗体IgY作为标记或固相抗体类风湿因子干扰的排除补体干扰l固相抗体和标记二抗可抗体分子发生变构,从而其Fc段的补体C1q结合位点被暴露出来,这样C1q就成为一个中介物将二者交联起来,从而出现假阳性结果。l固相抗体也会因为活化补体的结合,封闭抗体的抗原表位结合能力,而引起假阴性结果或结果偏低。 补体干扰的排除l56 30min加热
7、可使标本中补体C1q灭活l使用特异的鸡抗体IgY作为标记或固相抗体异嗜性抗体的干扰天然的异嗜性抗体(IgG)可分为两类:l可结合于山羊、小鼠、大鼠、马和牛IgG的Fab区域l可结合于小鼠、马、牛和兔IgG的FC区表位,通过交联固相和标记的单抗或多抗而出现假阳性反应。异嗜性抗体干扰的排除l使用特异的兔F(ab)2片段作为固相或标记抗体。l在标本或标本稀释液中加入过量的动物Ig,封闭可能存在的异嗜性抗体。但加入量不足或亚类不同时无效。l使用靶特异的非Ig亲和蛋白(Affibody)替代固相或标记抗体之一。采用噬菌体展示技术展示来自单个金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)联合文库的人IgA结合亲和蛋白,用
8、于IgA的测定,不受异嗜性抗体的影响。l使用特异的鸡抗体作为固相和测定抗体。抗鼠Ig 抗体的干扰l抗鼠抗体对使用鼠源性单克隆抗体的免疫测定,可产生假阳性结果 l 使用特异的抗体F(ab)2片段作为固相或测定标记抗体。l 在标本或标本稀释液中加入过量的鼠Ig,封闭可能存在的抗鼠抗体。l 使用特异的鸡抗体IgG作为固相和测定抗体。鸡IgG不与人抗鼠抗体反应。干扰排除可采用下述方法:自身抗体干扰l自身抗体如抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等,能与其相应靶抗原结合形成复合物,在免疫测定方法中可干扰相应抗原抗体的测定。l为避免以上情况出现,可在测定前用理化方法将其解离。 溶菌酶干扰l双抗体夹心法ELISA测定中
9、,溶菌酶可在包被的IgG和标记的IgG间形成桥接,从而导致假阳性。去除溶菌酶或将其封闭,Cu2+离子和卵白蛋白可有效地封闭溶菌酶,防止其联接IgG。外源性干扰因素l溶血、细菌污染、标本贮存时间过长、凝固不全、反复冻融标本溶血 l注意避免出现严重溶血。l血红蛋白类似过氧化物的活性,使反应显色。标本被细菌污染l细菌的生长,其所分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白产生分解作用l细菌的内源性酶如大肠杆菌的-半乳糖苷酶本身会对用相应酶作标记的测定方法产生非特异性干扰。 标本贮存时间过长 l标本在28下保存时间过长,IgG可聚合成多聚体,在间接法免疫测定中会导致本底过深、甚至造成假阳性。l血清标本如是以无菌
10、操作分离,则可以在28下保存一周,如为有菌操作,则建议冰冻保存。样本的长时间保存,应在70以下。 标本凝固不全 l血液采集后,离心分离血清没有完全凝固,离出的“血清”并非为完全的血清,其中仍残留部分纤维蛋白原,易造成假阳性结果l血液标本采集后,应使其充分凝固后再分离血清,或标本采集时用带分离胶的采血管或于采血管中加入适当的促凝剂。冰冻保存标本避免反复冻融l反复冻融所产生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子产生破坏作用,从而引起假阴性结果。试剂准备、标本收集、测定方法和仪器操作写出“标准操作程序”(SOP) 二、标准化操作及流程l标准品和质控品的分类l标准品和质控品的基本条件三、标准品和质控品的应
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