基因测序ppt课件.ppt
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1、 第一部分 2 DNA双螺旋 1953 中心法 1958 PCR 1983 DNA重 技1974 密 1966 DNA是 物 1952 1950200019901980197019602010 第一台自 序1986 毛管泳 序1996 光ddNTP 第一台商用 自序 1987 化学降解法和 sanger 1977 Illumina 2006 3700 1998 Solid system 2007 454 2005 Heliscope 2008 Gexp 2010 Ion pgm 2010 Nanopore 2008 Smrt 2009 第一部分 3 第一代基因序技 1977年桑格定了第一个基因
2、序列,是噬菌体X174的,全5375个碱基 在2001年,完成的首个人基因 就是以改了的Sanger法其序基 1.1975年由(Sanger)和(Coulson)开创的双脱氧链终止法 2.1977年吉尔伯特(Gilbert)发明的化学法(链降解) 3.在sanger法基上展而来的各种DNA序技 第一部分 4 Sanger法的原理 1.使用有放射性同位素的ddNTP来止DNA合成反 2.高分辨率性凝胶泳以及放射自影确定DNA序列 核心原理: 1.序度可达1000bp 2.准确性高,几乎100% 3.通量低,成本高,耗,不适合大模用 特点: Sanger法核心原理 第一部分 5 第一代序技在分子生
3、物学研究中 重要的作用,如人基 因 划(human genome project,HGP)主要基于第一代DNA序技 。目前基于光 和Sanger的双脱氧 止法原理的光自 序 仍被广泛地用。 随着人基因 划的完成,人 入了后基因 代,即功能基 因 代, 的序方法已不能足深度序和重复序等大 模基因 序的需求,促使了新一代DNA序技的生,即第二 代序技。 第二部分 6 第二代基因序技 核心原理:合成 序(SBS) 基本步:文制克隆DNA簇的生序反 第二部分 7 具代表性的第二代序平台: 1.光 -美国Illumina 公司的基因 序(genome analyzer,GA) -瑞士Roche 公司的4
4、54 -美国ABI 公司的寡聚物接 序(sequencing by oligo ligation detection, SOLiD) 第二代基因序技 2.PH变化 -美国Life Technologies 公司的Ion Torrent个人化操作基因组测序仪(PGM) 第二部分 8 Illumina序平台 美国Illumina 公司的基因 序(genome analyzer,GA) Illumina的Solexa和Hiseq是目前全球使用量最大的第二代序机器 主要技点: 1.可逆止的光dNTP 2.合成序 第二部分 9 Illumina序平台序原理 文构建 SBS序式pcr Flowcell 序
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